194304. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immobilizált enzim aktivitásának szintentartására
1 194 304 2 szükséges az aktlvltásveszteség pótlására és a fruktózzá alakulás 44%-ra való emelésére. Ennek megfelelően glükóz-oldathoz, amely a fenti sókat tartalmazza. A kolonna betápláló vezetékét az 5 enzimet tartalmazó glükóz-oldathoz kapcsoljuk és 0,3 ml/perc sebességgel engedjük lefolyni az egészet. Az enzimadszorpciós folyamat alatt képződő termékből mintát veszünk és megvizsgáljuk. A vizsgálat eredménye azt mutatja, hogy oldható izomerázt nem tartalmaz. A vizsgálatot úgy végezzük, hogy a 10 terméket tartalmazó mintát 16 óra hosszat inkubáljuk 61°C-on és méijük a fruktóztartalom növekedését. Ezután kristályos glükózból készült oldatot folyamatosan táplálunk be azért, hogy vizsgáljuk a további immobüizált aktivitást. A tápvezetéket vissza- 1 ^ kapcsoljuk a keményítő-hidrolizátumhoz és a távozó termék fruktózszintjét 44%-ra állítjuk. A folyamatsort, amely abban áll, hogy a fruktózszintet a távozó termékben fokozatosan körülbelül 40%-ra engedjük csökkenni, a tápvezetéket egy kristályos glükózból készült oldathoz kapcsoljuk az gO immobüizált aktivitás mérésére, oldható enzimet adagolunk a betáplálásra kerülő glükózáramba, újból megvizsgáljuk az immobüizált aktivitást és a tápvezetéket visszakapcsoljuk a kukoricakeményítőhidrolizátumhoz, 17 héten keresztül fenntartjuk. A kísérlet fennmaradó 10 hete alatt a folyamatsort 25 módosítjuk annak érdekében, hogy megszüntessük az immobüizált aktivitás mérését az enzimadagolás előtt és után. Ezután szabályos időközökben állandó oldható enzimmennyiséget adagolunk. A fruktóztartalmat csupán az önkényesen megválasztott 40— 44% határok között engedjük változni, amelyet az átfolyási sebességgel tartunk ezen az állandó szinten. Természetesen szőkébb határokat is választhatunk, de ez az oldható enzim gyakoribb adagolását teszi szükségessé. 7,5 hetes működés után az enzimaktivitást megkétszerezzük a kolonnában, amelynek csupán olyan hatása van a műveletekre, hogy az átfolyási sebesség növelése válik szükségessé a 40—44%-os fruktóztartalom elérése céljából. Mintegy 13 hetes üzemeltetés után a sószinteket a betáplálásra kerülő kukoricakeményítő-hidrolizátumban 1 mmól MgS04-re (5 mmólról) és 2 mmól NaHS03-ra (5 mmólról) csökkentjük. Az enzimtöltés során a távozó termék vizsgálata a 20. hétnél bizonyos csökkenést mutat az oldható aktivitásban. A hiány észlelése előtti utolsó enzimadagolás az összes adszorbeált enzim értékét 649 IGIU/g-ra növeli vagy szorosan megközelíti a kezdetben mért 684 IGIU/g értéket. A hiány növekszik az ezt követő utánadagolási műveletek során, bár elegendő friss enzim adszorbeálódott ahhoz, hogy a fruktózzá alakulást 40% felett tartsuk. Az a tény, hogy még enzim adszorbeálódott a kezdeti mérés után, a felvevőképesség növekedését mutatja és bizonyos mennyiségű inaktív enzim deszorbeálódott. Az I. táblázat összefoglalja a fruktóztermelést és az enzimadagolást 27 hetes kísérlet idejére. A termelt fruktóz mennyiségét a szárazanyagra számított 43%os fruktózszirup gramm-mennyiségeként fejezzük ki. A hetenkénti tényleges fruktóztermelés adatait 43%-os fruktóztermelésre szabályoztuk. I. Táblázat Izomeráció és enzimadagolás összefoglalása Hét Enzimadagolás IGIU Enzimfelhalmozódás IGIU Átlagos fruktóz % Felhalmozódó fruktóz g 43% szárazanyag Enzimhatásosság IGIU/g 43%-os fruktóz 1 2600 2600 43,7 2059 1,26 2 42,5 3606 0,72 3 720 3320 39,1 4851 0,68 4 42,3 6533 0,51 5 43,1 8292 0,40 6 41,6 9891 0,34 7 39,8 11298 0,29 8 3200 6520 39,5 12379 0,53 9 44,7 15293 0,43 10 44,6 18302 0,36 11 43,5 20476 032 12 43,6 22789 0,29 13 470 6990 41,1 24856 0,28 14 940 7930 41,4 26764 030 15 44,3 29322 0,27 16 40,4 31298 0,25 17 940 8670 43,4 33733 0,26 18 40,7 35433 0,24 19 940 9610 43,2 37949 0,25 20 940 10550 42,7 40162 036 21 42,0 42264 0,25 22 940 11490 43,3 44497 036 23 41,9 46730 0,25 24 940 12430 41,9 48810 035 25 44,5 51011 0,24 26 43,0 52737 0,24 27 770 13200 41,1 54528 034 5
