194302. lajstromszámú szabadalom • Új lemeztáptalaj és eljárás szalmonella speciesek hatékonyabb izolálására
1 A találmány tárgya új lemeztáptalaj és eljárás Salmonella specieszek hatékonyabb izolálására. A Salmonella kimutatása nagy fontosságú az orvos-diagnosztikai, közegészségügyi-járványügyi, állatexport-import - élelmiszerkereskedelmi tevékenységek vonatkozásaiban. Nagy jelentőségű még bizonyos élelmiszerek esetében a Salmonella négativités megállapítására, illetve deklarálása is. A Salmonella fertőzöttséget, főleg székletben, élelmiszerben és vízben (felszíni- és szennyvíz) szokták vizsgálni. A Salmonella kimutatásánál — számos más baktériumhoz hasonlóan -, az elszaporítás és a jelenlévő többi, kompetitiv flórától való izolálás a fő probléma. Annak érdekében, hogy a rendkívül ellenállóképes, igen gyorsan szaprodó és az egészségre roppant káros Salmonellát biztonságosan lehessen kimutatni, eddig általában nem közvetlen leoltást alkalmaztak, hanem elődűsított és/vagy szelektíven dúsított tenyészetet alkalmaztak leoltásra. A dúsítás célja a Salmonellák számának növelése és a kompetitiv flóra számának csökkentése. Ennek a megoldásnak az a hátránya, hogy minden baktériumféleség elszaporodik, vagyis a kompetitiv flóra száma is nő. Az elődúsítóban, illetve dúsítóban- mivel ezek folyékonyak — a viszonylag kis mennyiségben jelenlévő baktériumféleségek is erőteljesen szaporodnak. További hátrányként jelentkezik, hogy a dúsítóban levő szelektáló anyagok magát a Salmonellát is károsíthatják, tehát ez a vizsgálati módszer- azon túlmenően, hogy rendkívül időigényes —, nem teljesen megbízható. Az ismert módszerek szerint a dúsított folyékony leves-táptalajból oltanak a szilárd, szelektív differenciáló lemeztáptalajra, izolálás céljára. Ez a Salmonellát kísérő egyéb - és az előzőekben részletezettek szerint elszaporodó — baktériumflóra túlsúlya miatt sokszor nem kielégítő eredményt szolgáltat és további átoltásokat igényel. Az ismert elődúsításos, illetve szelektív dúsításos módszer szerint kapott Salmonella-tenyészetet például a következő ismert lemeztáptalajokra oltják: Édel és Kampelmacken-féle Brillantzöld-fenolvörös agar táptalaj (az ISO 3565 szabványa szerint): 4,0 húskivonat 10,0 g pepton 3,0 g nátrium-klorid 0,8 g Na2HP04 0,6 g NaH2P04 12,0g agar 10,0 g laktóz 10,0 g szacharóz 0,09 g fenolvörös 0,005 g brillantzöld 1000 ml desztillált víz. Ismeretes továbbá a következő összetételű lemeztáptalaj: Compendinium of Methods for the Microbiological Examination of Foods (Americal Public Heath Association Washington). 3,0 g élesztő kivonat 10,0 g pepton (proteáz) 5,0 g nátrium-klorid 10,0g laktóz 10,0 g szacharóz 0,08 g fenolvörös 0,00125 g brillantzöld ■20,0 g agar 2 1000 ml desztillált víz. Ezeknek az a hátránya, hogy dúsított és|vagy elődúsított tenyészetnél alkalmazhatók, ami a vizsgálat időtartamát lényegesen megnöveli, továbbá az ismert módszernek eszköz- és anyagszükséglete is jóval nagyobb. Az volt a célkitűzésünk, hogy olyan összetételű lemeztáptalajt állítsunk elő, amely az ismertek hátrányait kiküszöböli és lehetővé teszi a Salmonella biztonságosabb kimutatását a lemeztáptalajon, bizonyos vizsgálati anyagok esetében már közvetlen leoltás után is. Azt találtuk, hogy a lemeztáptalaj részben ismert, részben új alkotóinak, illetve ezek mennyiségének találmányunk szerinti kombinálásával olyan lemeztáptalaj állítható elő, amely biztosítja a kompetitiv flóra visszaszorítását és így a Salmonella biztonságosan, számos esetben már közvetlen leoltás után is egyértelműen izolálható. Ez azt jelenti, hogy az eddigi, dúsításos, többszöri leoltásos módszer helyett számos esetben egy leoltás is elegendő, ami a vizsgálati időtartam lényeges lerövidítését eredményezi. A találmány tárgya tehát lemeztáptalaj Salmonella specieszek izolálására, amit az jellemez, hogy szokványos lemeztáptalaj-komponensek mellett brillantzöldet és kívánt esetben neutrálvöröst, valamint magnézium-kloridot olyan mennyiségben tartalmaz, amely a Salmonella számára fokozott szelektivitást biztosít. Közelebbről meghatározva a Salmonella Izolálására szolgáló új lemeztáptalaj: 1,5-3,5 g húskivonatot, 4,0-6,0 g trjpszinnel emésztett kezeinpeptont, előnyösen triptont 0,25-0,5 g P04-iont, 0,5-1,5 g élesztőkivonatot, 0,02-0,03 g brillantzöldet 0,02-0,03 g neutrálvörös indikátort, 12,0-16,0 g magnézium-kloridot 3,3-5,5 g cukrot, előnyösen szacharózt vagy glukózt 12-15 g agart, és ad 1000 ml desztillált vizet tartalmaz. Különösen előnyös, ha a fenti lemeztáptalajt ráoltás után 43°C-on inkubáljuk. A P04-ion előnyösen Na2HP04'2H2 O-ból származik. Egy előnyös táptalaj összetétele pl. a következő 11-re megadva 1. huskivonat 3,0 g 2. Kazeinpepton 5,0 g 3. élesztőkivonat 1,0 g 4. Na2HP042Ha0 0,5 g 5. agar 13,0 g 6. glükóz 0,3 g 7. szacharóz 3,0 g 8. brillantzöld 0,03 g 9. magnézium-klorid 15,0 g 10. neutrálvörös 0,03 g A táptalajhoz mindvégig azonos minőségű standard ingredienseket használunk, hiszen csak így képzelhető el az egyes komponensek pontos kvantitatív behatárolása a többivel összhangban. Ilymódon 1. a húskivonat előnyösen Oxoid Lab-lemco, 2. a tripton előnyösen Oxoid, 3. az élesztőkivonat előnyösen Oxoid Yeast extrakt, 4. NaaHP04 előnyösen analitikai minőségű 194 302 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
