194282. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, a B-lánc C-terminálisán módositott inzulin származékok és ilyeneket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 jelentésben A találnián\ szerinti eljárással előállított készítményeknél, amelyek valamely ismert késleltetőanyagot, így pl. protamin szulfátot, globint vagy cinket tartalmaznak megfelelő mennyiségben a késleltetőanyagot a hatóanyaggal vagy annak egy részévéi elkeverve alkalmazzuk, de a hatóanyagokat több különböző késle ltetőanyagi>t ta.talmazó keverékkel is kombinálhatjuk. A fentiek alapj m a találmány szerinti eljárással előállított készítményekkel igen sokrétű és igen finoman beállítható halast érhetünk el, így felhasználásukkal jelentős haladav mutatkozik elsősorban a diabetes kezelésénél felépo utóhatásokkal kapcsolatosan A találmány nz önti eljárási a következő példákkal illusztráljuk, anélkül, hogy azokra korlátoznánk. A példákban Adoc jelentése adamantil oxi-karboxil-, ílac jelentése ecetsav, DMF jelentése dimetil-formamid és Hl jelentése humáninzulín. 1 példa 6 g sertésinzulint és 37 g H-Thr-Arg (Adoc)2-OBut- Hacot 20 ml vízben es 5 ml jégecetben oldunk és a pH értékét jégeceitel 4 ó-re beállítjuk. Ezután az oldatot 0wC-ra hűtjük, es hozzáadunk 2 ml vízben oldott 0,6 g trips/int. A reakciókeveréket 4—10°Con 24 órán át állni hagyjuk, majd a humáninzulin-B31-Arg (Adoc)2-OBut reakcióterméket 200 ml metanollal vagy acetonna! kicapjuk és lecentrifugáljuk A tiszta oldalból a drpeptid-száimazékokat visszanyerhetjük. A csapadékot mégegyszer metanol/éter eleggyel mossuk, vákuumban szárítjuk. HPLC (nagynyomású rétegkromatográfia) segítségével meghatározzuk, hogy a nyers keverék 47% HI-Arg®31 (Adoc)2-0But terméket tartalmaz. Az elválasztást és a tisztítást szilikagélen a 82 359 számú európai bejelentés közzétételi iratában leírtak szerint végezzük, A Hl ArgB31 OH előállítását a fenti termékből egy órás trifluor-ecetsavas kezeléssel, majd éteres kicsapással végezzük. 2 példa 600 mg sertésinzulint és 12,6 g Hac-Thr-Arg (Adoc)2-Arg-(Adoc)2-OButot együtt 2 ml víz, 0^8 ml DMF és 0,5 ml ecetsav elegyében oldunk és 0 C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 0,2 ml vízben oldott 60 mg tripszint 24 óra elteltével HPLC segítségével 40% HI-Arg®3‘-(Adoc)2-Arg®32 (Adoc)2-OBut mutatható ki. 3 példa 60 mg sertésinznlint és 676 mg Hac-2- HCLThr (But)-D-Arg-Arg (Adoc)2—OBut-ot 0,5 ml víz, 0,2 ml dimetilformamid és 0,1 ml ecetsav elegyében oldunk, majd az oldat pH-ját rietil-aniinnal 5 értékre beállítjuk. Ezután hozzáadunk 0,1 ml vízben oldott tripszint. 24 óra elteltével HPLC segítségível 34% HI-(B30)-(But)ILArg®3 ’-Arg®32 <Adoc)2-OBut mutatható ki. 4. példa 6 g humáninzulint és 48 g HCl.Hac Thie (But).Arg (Adoc)2-OBut-ot 20 ml víz és 5 ml ecetsav elegyében 2 oldunk és az 1. példában leírtak szerint 0,6 g tripszinnel reagáltatjuk. 16 óra után az átalakulása 35%-os. 5. példa 85 mg sertés-projnzulint és 483 mg Hac.HCl.Thre (But)-Arg (Adoc)2-OBut-ot 0,5 ml víz és 0 3 ml ecetsav elegyében oldunk, a pH-i 5,0 értékre beállítjuk, és 0,1 ml vízben oldott 8 mg tripszinnel reagáltatjuk. Az átalakulás mértéke 24 óra után 37%. 6. példa 85 mg seités-proinzulint és 1,2 g Hac.Thre-Arg (Adoc)2-Arg (Adoc)2 OBut-ot az 5. példában leírtak szerint reagáltatunk. Az átalakulás HPLC meghatározás alapján 33%^os 7. példa 600 mg Dez-Phe®' sertésinzulint és 12,6 g Hac. Thr Arg (Adoc)2-Arg (Adoc)2-OBut-ot 2 ml víz, 0,8 ml DMF és 0,5 ml e< etsav jelenlétében oldunk és0°Cira lehűtjük Ezután hozzáadunk 60 ing tnpszint 0,2 ml vízben oldva 24 óra elteltével HPLC segítségével 45% Dez PheB'-HI-Arg®31 -(Adoc)2-ArgB3J-(Adoc)2 -OBut mutatható ki. 8. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy 6 g humáninzulint és 48 g 1 ♦Cl.Hac. Thr (But) Arg(Adoc).--OBut ot 0,6 g lizil-endopeptidáz jelenlétében reagáltatunk Az 1. példa szerinti terméket 34%-os kiteuneléssel nyerjük. A fenti példák szerint előállított vegyületeknél az alábbi izoelektromos pont értékeket: Hl Arg®31 OH: 6,5 Hl-Arg®3 1 Arg®3 2-OH: 7,0 valamint az alábbi retendós időket (HPLC) határoztuk meg: Sertésinzulin: t = 23 perc HI-Arg®2 3 * * 6 ‘-OH: t = 26 perc HI-Arg®31 Arg®3 2 -OH: t * 28 perc Dez Phe®1-Arg31-Arg32-OH: t= 20 perc Hl-Arg®3‘-OH tartalmú, késleltetett hatású készítmény 10 ml össztérfogatú vizes készítmény az alábbi komponenseket tartalmazza: HI-Arg®31 -OH (27,5 NE/mg) 14,5 mg Protanun szulfát 1 3 mg Nátrium dihidrogén-foszfát-dihidrát 21,0 mg m-Krezol 15,0 mg Fenol 6,0 mg Glicerin 160,0mg A készítmény pH értékét ln HC1 ill. In NaOH adagolásával 7,3-as értékre állítjuk be. A knstályos .'.uszpenziókészítmény 0,4 NE/kg dózisban nyulaknak adagolva jelentős késleltető hatás mutatható ki. 194.282 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
