194280. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Új, nagy hatékonyságú gonaldoliberin-analógok és az ezeket tartalmazó gyógyaszati készítmények előállítására
1 2-Dbt-OMe-hidroklorid só 3,5 ml dimetfl-formamid és 0,1 ml trietil-amin elegyével készített, —5 °C-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. Ezután az oldat pH-ját szükség esetén 7-re állítjuk be trietil-aminnal, majd a réakcióelegyet —5 °C-on 1 óra hosszat, 0 °C-on pedig 2 óra hosszat keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etil-acetáttal, majd éterrel el dörzsöljük, szűrjük. Az így kapott nyers terméket szilikagél oszlopon (8x2 cm) a 4. számú oldószereleggyel kromatografáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd éterrel eldörzsöljük a maradékot. így 850 rag cím szerinti anyagot kapunk. Móltömeg: 875. Rt* = 0,3. Aminosav-analízis: Ser = 0,90; Glu = 1 j05; His = 0,99; Trp = 1,00. A Dbt-t nem határoztuk meg. d) Glp-His—Trp-Ser-Dbt—N2Hj 280 mg Glp-His—Trp-Ser-Dbt-OMe pentapeptídet feloldunk 5 ml dimetil-formamidban, 0,8 ml hidrazin-hidrátot adunk hozzá, majd 24 órán át 60 °C-on keverjük. A kivált anyagot kiszűrjük, vízzel mossuk, majd all. számú oldószerelegyben oldva Sephadex G—25 töltetű oszlopon (98 x 2 cm) kromatografáljuk. A fő komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük, szárítjuk. így 205 mg(70%) dm szerinti vegyületet kapunk. Móltömeg: 875. Rf* =0,25. e) Glp-His-Trp—Ser-Dbt-Asp(OMe)—Leu-Arg- Pr o-etil amid-diace tát 45 mg Glp-His-Trp—Ser-Dbt-N2H3 pentapeptid-hidrazidot feloldunk 1 ml dimetil-formamidban, az oldatot —20 °C-ra hűtjük, majd keverés közben 0,035 ml 6 mól/1 vizes sósav-oldatot és 33 mg nátrium-nitrit tömény, vizes oldatát adjuk hozzá. 15 perc elteltével 31 mg H-Asp(OMe)-Leu—Arg-Pro-etilamid-diacetát só 0,5 ml dimetil-formamiddal készített oldatát, majd 5 perc elteltével 0,3 ml 10%-os, dimetil-formamidos trietil-amin-oldatot adunk a —10 °C-on kevert reakcióeiegyhez. A keverést 30 percen át -10 "C-on, 1 órán át 0 °C-on, végül 48 órán át 24 °C-on folytatjuk. Ezt követően a dimetil-formamidot vákuumban lepároljuk, a maradékot 10%-os vizes ecetsav-oldatban oldva Sephadex G-25 töltetű oszlopon (60 x 2 cm) kromatografáljuk. A fő komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. így 35 mg cím szerinti peptídet kapunk. Móltömeg: 1502. Rf6 = 02-5. példa Glp- Hi s-Trp— Ser-Tyr- Asu- Leu- Arg- Pro-e tűami d-diacetát 50 mg Glp-Hs—Tip-^Sér-Tyr-Leu-Arg-Asp- OMe-Pro-ctilamid-diacetátot (előállítva a 187503 sz. magyar szabadalmi leírás 1. példája szerint ) feloldunk 15 ml vízmentes dimetil-formamidban és 2,4 ml vízmentes trietil-amint adunk hozzá, majd az oldatot 50 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot 30 ml ecetsavban oldjuk, majd újra bepároljuk. A visszamaradó olajos anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk, majd híg ecetsavban oldjuk és lipfllizáljuk. így 48,2 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk. [a],.25 = —50,3 ° (c * 1,0; 1%-os ecetsav-oldatban). Rf = 0,57; Rf10 = 0,58. 6. példa Glp—His-Trp—Ser—Tyr—Asu—Leu—Arg—Pro-e tila mi d-bi sz(triflu or-ace tá t) a) Z—Asu—Leu—Arg(NOí)—Pro-etilamid 300 mg, az 1. példa a) része szerint előállított Z~Asp(OMe)— Leu— Arg(NÓ2 )~Pro-etilamid tetrapeptidet feloldunk 100 ml vízmentes dimetil-formamidban, 5,7 ml vízmentes trietil-amint adunkhozzá, majd 60 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot ecetsavban oldjuk és újra bepároljuk. Az így kapott olajos maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. így 282 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk. Móltömeg: 687. Op : 112-115 °C. R/ = 0,34; Rf2 =0,84. b) H-Asu— Leu—Arg— Pro-etilamid-diacetát 280 mg Z—Asu—Leu—Arg(NOj)—Proetilamidot 3 ml metanol és 3 ml ecetsav elegyében feloldunk és keverés közben 140 mg 10%k>s palládiumos csontszén katalizátor jelenlétében 7 órán keresztül hidro gén gázt áramoltatunk át rajta. Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. így 226 mg (88%) szilárd, enyhén higroszkópos anyag formájában kapjuk a cím szerinti vegyületet. Móltömeg: 628. [a] 25 = -45,2 0 (c = 1,0 metanol). Rf - 0,29; R/ = 0,60; Rf13 = 0,50. c) Glp-His-Trp—Ser-Tyr—Asu- Leu-Arg-Pro-e tila mi d-bisz(triflu or-ace tát) Mindenben az 1. példa c) része szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy kiindulási anyagokként 217 mg Glp—His-Trp—Ser—Tyr—N2H3 pentapeptid-hidrazidot és 171 mg H-Asu-Leu- Arg-Pro-etilamiddiacetátot alkalmazunk. 7. példa Glp-His-Trp-Ser-Tyr(3,5-3H)-Asp(OMe)-Leu-Arg-Pro-etilamid 2 mg Glp—His-Ser-Dbt-Asp(OMe)—Leu-Arg— Pro-etilamidnüacetátot feloldunk 0,5 ml 1 mól/1 ecetsav-oldatban, majd az oldatot lefagyasztjuk, A befagyott oldat tetejére 10 mg 10%-os palládiumos alumínium-oxid katalizátort (Fluka gyártmány) szórunk, 194.280 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
