194280. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Új, nagy hatékonyságú gonaldoliberin-analógok és az ezeket tartalmazó gyógyaszati készítmények előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás az új (I) általános képletű Glp-His-Trp-Ser-X-W-Leu-Arg-Pro-Y (I) gonadoliberin-analógok savaddíciós sói — ahol X , Tyr- vagy 3,5-dibróm-tirozU-csoportot, W Asu- vagy egy Asp(OR)- általános képletű csoportot jelent, amelyben az R egy 1-4 szénatomos alícil-csoportot, vagy egy fenil-(l—4 szénatomos)- alkil-csoportot képvisel és Y jelentése glicinamid- vagy egy 1-4 szénatomos alkil amino-csoport — valamint a hatóanyagként ezeket tartalmazó, szexuális folyamatokat befolyásoló gyógyászati készítmények előállítására. A leírásban megnevezett a-aminosavak mindegyike „L” konfigurációjú, ezért ezt a továbbiakban nem jelöljük. A hipotalamikus eredetű natív gonadoliberin nevű peptidhormon az agyalapi mirigy ben a szexuális folyamatokat szabályozó luteinizáló hormont (a továbbiakban LH) és a follikulusz stimuláló hormont (a továbbiakban FSH) szabadítja fel. Ezen hormonokon keresztül végső soron stimulálható, illetve gátolható az ivarzás, a peteérés, az ovuláció, a spermatogenezis, stb., mely folyamatok alapvetően meghatározzák a gerincesek természetes szaporodását. Újabban a GnRH -analógok alkalmazásával prosztata és emlő tumorok gyógyítása mutatkozik ígéretesnek. A natív GnRH szintetikus előállítására kidolgozott eljárást a 165 546 sz. magyar szabadalmi leírás ismerteti. Az ismert eljárás szerint 6+4 fragmens-kondenzációval állítják elő a GnRH-t. Lépésenkénti felépítést alkalmaztak a 3,888,836 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint. A GnRH terápiás alkalmazhatóságának ismeretében nagy számú analógot állítottak elő, amelyek közül különösen fontosak az úgynevezett szuperaktív GnRH-analógok. Ismeretes (J.Sandow és munkatársai, Control of Ovulation, Butterworths, London, 1978, 49—70.), hogy ha a natív GnRH hatos helyzetű Gly csoportját bármilyen ,J)” konfigurációjú a-aminosavra cseréljük, jelentősen megnő az így kapott GnRH-analóg hormon-hatásának (LH felszabadító hatás) mértéke, és megnő a hormon hatás időtartama is. A 897 455 sz. belga szabadalmi leírásban olyan GnRH-analÓgokat ismertetnek, amelyekben a hatos helyzetű Gly csoportot egy D-l-amino-3,3-dimetil-butánsav-csoport helyettesíti. A 4,41 5)4 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás olyan szuperaktív GnRH-analógokra vonatkozik, amelyekben a hatos helyzetű Gly csoport helyén „D” konfigurációjú Trp, Ala, Phe, Lys, Pro, Met, Leu, Glu, Asn, Arg, Tyr, Cys, His, Chg, Nva, Om, Thr, Abu, Phg, He, Gin, Asp, Nie vagy Val állhat és a C-terminális Gly csoport hiányozhat és/vagy szubsztituálva lehet. A célve gyű leteket halak kezelésére javasolják használni. A 4,382,922 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból a hatos helyzetben szubsztituált fenil-csoportot tartalmazó „D” konfigurációjú Phe-csoportot tartalmazó GnRH-analógok ismerhetők meg. A 24 38 350 sz. német szövetség köztársaságbeli közzétételi irat a hatos helyzetben ,,D” konfigurációjú, szubsztituált Ser, Cys Asp, Glu, Orn és Lys csoportot tartalmazó analógokat ismertet. A 603 559 sz. svájci szabadalmi leírás szerint az 5,6 és 7 helyzetű aminosav-csoportokat helyettesítik főként „D” konfigurációjú egyéb amin osa v-csoportokkal. Itt is konzekvensen ,,D” konfigurációjú aminosav-csoport van mindig a hatos helyzetben. Az irodalom a fentieken túlmenően még számos publikációt tartalmaz, amelyek mindegyike szuperaktív GnRH- analógokra vonatkozik. Ezekben azonban közös vonás az, hogy a hatos helyzetű aminosav-csoport mindig egy nem natív aminosavból vezethető le. Ugyancsak jelentős GnRH aktivitással rendelkeznek azok az analógok is, amelyekben a hatos pozícióban valamilyen „L” konfigurációjú j3-aminosav van (187 503 sz. magyar szabadalmi leírás.) Úgyszintén jelentős biológiai hatással rendelkzik az a GnRH-analóg is, amelyben a hatos és hetes pozíciókat egy „L” konfigurációjú 7-laktám gyűrű foglalja el (Science, 210, 656. (1980). A fentiek alapján megállapítható, hogy a GnRH eddig ismertté vált analógjai kivétel nélkül tartalmaznak legalább egy olyan szerkezeti elemet, amely a természetben nem fordul elő. Márpedig endogén hatású peptidhormonok gyógyászati célból történő alkalmazása esetén különösen előnyös, ha az kizárólag az élő anyagot alkotó natív aminosavakat tartalmaz, illetve ha kellő mértékben valószínűsíteni lehet, hogy a beadásra kerülő hatóanyag metabolikus termékei nem válthatnak ki nem kívánatos mellékhatásokat. Célul tűztük ki olyan GnRH-analógok felépítését, amelyek a natív GnRH-nál hosszabban tartó és nagyobb LH felszabadító hatást mutatnak, és kizárólag „L” konfigurációjú a-aminosavakból épülnek fel. Azt találtuk, hogy a találmányunk szerinti (I) általános képletű, ,JD" konfigurációjú aminosavat nem tartalmazó GnRH-analógok a natív GnRH-t messze meghaladó LH felszabadító hatékonyságúak. A találmány szerint úgy járunk el, hogy a) egy (II) általános képletű védett pepiidet W—W—Leu—Arg-Pro—Y (II) ahol W és Y jelentése a fenti és V terc-butil-oxi-karboníl-, benzil-oxi-karbonil- vagy 9-fluorenil-metol-oxikarbonil- védőcsoportot jelent — a V védőcsoport eltávolítása után egy (V) általános képletű Glp- Híj-Trp— Ser— X—NH—NHj (V) pentapeptid-hidrazidból in situ képzett pentapeptidaziddal reagáltatunk, majd kívánt esetben egy kapott, a W helyén Asp(OR)-csoportot tartalmazó (I) általános képletű GnRH-analógot — ahol X Rés Y jelentése a fenti - W helyén Asu-csoportot tartalmazó (I) általános képletű GnRH-analógok előállítására — ahol X, Y és R jelentése a fenti — vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogén bázissal kezelünk, vagy X Y és R jelentése a fenti - vízmentes szerves oldószerben valamely szerves tercier nitrogénbázissal kezelünk, majd a kapott (I— általános képletű GnRH-analógot valamely savval kezelve savaddíciós sóvá alakítjuk, majd kívánt esetben a kapott (I) általános képletű GnRH-analógok savaddíciós sóját - ahol X, W és Y jelentése a fentiekben megadott — valamely más, gyógyászatiig elfogadható savval kezelve egy, a kapottól eltérő savaddíciós sóvá alakítjuk. A találmányunk szerinti eljárásban szerves tercier nitrogénbázisként előnyösen trietil-amint, N-metiimorfolint vagy piridint használhatunk. Szerves oldószerként bármely poláros, aprotikus oldószer alkalmazható. Előnyös, ha oldószerként dimetil-formami-194.280 s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
