194260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízmentes, kristályos dianemicin-19-dezoxiaglükon-nátriumsó előállítására
1 A találmány tárgya eljárás vízmentes, kristályos dianemicin-19-dezoxi-aglükon-nátriumsó előállítására, amely alkalmas arra, hogy gyógyszerkészítményekben hatóanyagként alkalmazzák. A dianemicin-19-dezoxi-aglükon ionorf antibiotikumot Clemer és munkatársa a 4431801 számú USA szabadalomban és Westley és munkatársai a J.Antibiotics, 37, (1981) közleményében írták le. Az (I) általános képletű vegyület a kokcidiózíssal, bélhuruttal, sertés vérhassal, Theileriozissal szemben hatékony, ezen kívül serkenti a baromfik és kérődzők növekedését. A dianimin-29-dezoxi-aglükont nátriumsójaként izolálják a Streptomyces halstedü ATCC 31812 mikroorganizmusból. Biológiai aktivitása alapján a kinyert anyag 90%-os tisztaságú. A sót különböző oldószerekben átkristályosítva, tovább tisztíthatják. Ha nincsenek tekintettel az oldószer tisztaságára, az átkristályosítás eredményeként hídrátot kapnak. Noha az átkristályosított termék a HPLC vizsgálatok szerint viszonylag tiszta, a kristályos Röntgen-diffrakciós vizsgálata és a differenciál scanning kalorimetria szerint nem egységes és olvadáspontja változó. A hidrát kristályok vákuumos szárításával amorf szilárd anyaghoz jutnak. Néhány szerves oldószerből történő átkristáiyosításnál ugyancsak amorf és nedvszívó anyaghoz jutnak. A dianemicin-19-dezoxi-aglükon-nátrium eddig ismert fizikai formái tehát olyan tulajdonságokat mutatnak, melyek alapján nem alkalmazhatók gyógyszerként, hiszen a nevezett hatóanyag gyógyszerkészítményként való elkészítése az említett tulajdonságok miatt nehéz. A jellemző tulajdonságok — olvadáspont, -kristályszerkezet, differenciál scanning kalorimetriás adatok, stb. — hiánya rendkívülien megnehezíti, ha egyáltalán lehetővé teszi, a dianemicin-19-dezoxi-aglükon tisztaságának vizsgálatát. Felismertük, hogy az alábbi eljárással a dianemicin-19-dezoxi-aglükon-nátrium tartósan vízmentes, kristályos állapotban előállítható. Az eljárás a következő lépésekből áll: a) a dianemicin-19-dezoxi-aglükon-nátrium metilén-kloridos oldatát, mely 0,05%-nál kevesebb vizet tartalmaz, addig töményítjük, amíg a kristályosodás meg nem kezdődik, b) a kapott kristálypéphez legalább azonos térfogatú vízmentes hexánt adunk, és a szilárd anyagot kiszűrjük, majd szárítjuk. Az eljárás előnyös kivitelezés módjánál a metilén-kloridos oldat betöményítését úgy végezzük, hogy légköri nyomáson a forráspontja feletti hőmérsékletre melegítjük. A találmány szerinti eljárás tehát több lépésből áll, az első lépés a dianemicin-19-dezoxi-aglükon-nátrium száraz, metilén-kloridos oldatának ? betöményítése addig a pontig, ahol a nátriumsó kristályosodása megindul. Minthogy a dianemicin-19-dezoxi-aglükön megköti a szerves oldószerben levő vizet, és rendszerint monohidrát formájában kristályosodik ki, fontos, hogy az oldat vízmentes legyen. Ezek szerint, ha vízmentes nátriumsót akarunk nyerni, a dianemicin-19-dezoxi-aglükon metilén-kloridos oldata nem tartalmazhat 0,05%-nál több vizet. A metilén-kloridos oldatból a vizet többféleképpen eltávolíthatjuk. Használhatunk kémiai szárítóanyagokat, mint amilyen a nátriurn-szulfát, magnézium-szulfát, stb. de alkalmazhatunk más módszert is, például a maradék víz molekula szi2 tával vagy azeotropos úton történő eltávolítását. Előnyös, ha a metilén-kloridos oldat betöményítését légköri nyomáson végzett melegítéssel végezzük. Kellő hőt kell alkalmaznunk, hogy az oldatot forrásba hozzuk. Alternatív eljárásként végezhetjük a bepárlást közömbös gáz áramoltatásával is, vízmentes körülményeket biztosító rendszerben, vagy csökkentett nyomáson az oldószer forráspontja alatti hőmérsékleten. Amikor megindul a dianeinicin-19-dezoxi-aglükon-nátrium kikristályosodása, következik a második lépés. Ekkor annyi hexánt adunk a kristálypéphez vagy a keverékhez, hogy amennyire csak lehet, kinyerhessük a kívánt terméket a metilén-kloridos oldatból, A hexán nemcsak elősegíti a termék metilén-kloridból történő kikristályosodását, de nem gátolja a metilén-kloridban keletkező kristálytípus további kialakulását. Fontos, hogy a felhasznált hexán ugyancsak víz. mentes legyen, vagyis ne tartalmazzon 0,05%-nál több vizet. Ezt a már fentebb említett szárítási eljárásokkal érhetjük el. A hexán alkalmazott mennyisége nem döntő, noha kellő mennyiséget kell alkalmazni ahhoz, hogy a dianemicin-19-dezoxi-aglükon minél teljesebb mértékben kikristályosodjon a metilén-kloridból. Ha a kristályosodás megindult legalább azonos térfogatnyi hexánra van szükség ahhoz, hogy a kívánt termék kinyerését elősegítsük, Kevesebb mennyiség rosszabb kinyerést eredményez, míg ennél nagyobb mennyiség alkalmazásának nincs különösebb előnye. A kristályosodást követően a terméket kiszűrjük és szárítjuk. Szűrésnél kívánatos, hogy minél kevesebb levegővel érintkezzen a kiszűrt anyag, hogy elkerüljük a víz rákondenzálódását. Száraz nitrogéngáz alatt történő szűrésnél megvédhetjük az anyagot a nedvességtől. A kiszűrt, hexántól nedves anyagot szárítószekrényben száríthatjuk légköri nyomáson, vagy még hatékonyabban, csökkentett nyomáson, megemelt hőmérsékleten. A kapott kristályok viszonylag nagy, törékeny szálak, könnyen apríthat ók. A kiszűrt szilárd anyag a Karl Fischer módszerrel meghatározva 0,2—0,7% vizet tartalmaz. Az olvadáspont nagyon éles, és a differenciál scanning kalorimetriás vizsgálat egyetlen éles endotermet ad. Az elmondottak szemléltetésére az alábbiakban példákat adunk meg. A példák kizárólag szemléltető célzatúak, így a találmány oltalmi körét nem korlátozzák. 1. példa 1960 g dianemicin-19-dzoxi-aglükon-nátrium (88,2% aktivitású) 23,5 liter metilén-kloridban készült oldatához hozzáadunk 1,2 kg4A molakulszitát, és a keveréket szobahőmérsékleten hagyjuk állni egy órán keresztül. A keveréket Whatmann2 papíron és 784 g celiten keresztül szűrjük, a kiszűrt anyagot 8 liter metilén-kloriddal mossuk. A szürletet és a mosófolyadékot egyesítjük, és gőzfürdő hőmérsékletén, légköri nyomáson kb. 3,8 literre pároljuk, amikor is megindul a kristályképződés. További 500 ml oldószert párolunk el, a melegítést megszüntetjük és keverés mellett, egyenletes áramban 11 liter hexánt adunk a keverékhez, A keveréket egy órán át tovább kever-Íük, a kristályos anyagot kiszűrjük, 8 liter száraz lexánnal mossuk, 50 ®C hőmérsékleten és 133 Pa 194.260 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
