193936. lajstromszámú szabadalom • Fusarium oxysporum lipázt tartalmazó mosószer adalékanyag
193936 kísérletben határoztuk meg. All. példa szerinti eljárást (azaz a hőmérséklet, pH és keverési sebesség optimális értékeit) alkalmaztuk. A szója-olaj koncentráció értékét változtattuk « táptalajban. Az alábbi eredményeket kaptuk: Példaszám 13 14 15 Hőmérséklet a fermentorban C 34 34 34 24 óra eltelte után a pH érték 6,5 értékén tartva X X X keverő sebessége ford/perc 800 800 800 Szója-olaj % 0 1 2 LU/ml felúazó 50 170 170 16. példa Jelen példában bemutatjuk a találmány szerinti eljárás az enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának íélüzcmi termentorban végzett előállítására. 300 literes inokuláló tartályban az alábbi táptalajt készítjük el: buzaáztátó oldat 7,2 kg szója-olaj 1,5 kg kalcium-karbonát 1,5 kg pluronic 25 ml vízzel feltöltve 290 l-re A táptalajt 1 órán át L2ll’C-on sterilizáljuk. 7,2 g glükózt,. 7,2 kg citromsavat tartalmazó 12 liter oldatot sterilizálunk fél órán át 121°C-on és a buzaáztató folyadék keverékhez adjuk. Az elegyet 30®C-ra kötjük, majd DSM 2672 spórákkal inokuláljuk. A spórákat élesztő extraktumot, foszfátot, magnéziumot, glükózt és agar-agart tartalmazó Fernbach lombikból vesszük, melyet előzőleg 7 napon át 30°C-on inkubáltunk. Az ínokulálás után a levegőztetést azonnal megkezdjük (300 1/perc) és 20 óra után keverni kezdjük az elegyet (250 ford/ /perc), A hőmérsékletet 30°-on tartjuk és a szaporodást 29 óráig fenntartjuk. Az így kapott kultúra 30 literét átoltjuk a fő fermentorba, ami az alábbi táptalajt tartalmazza' szójababliszt 15 kg KjHPO« 0,6 kg Na*HP04.2H20 1,2 kg szója-olaj 3 kg pluronic 25 ml és taWUtvtx 275 literre. A táptalajt ! órán át 121 "C-on, sterilizáljuk. Külön 25 I vízben 15 kg glükózt és 15 g citromsavat sterilizálunk 30 percen át 121 **C- on, majd a szójaliszt kivonathoz adjuk. Ar, inokulálést kővetően a levegőztetést megkezdjük (300 1/perc). A keverést Is meg---10 16 20 26 30 35 40 45 50 55 60 65 kezdjük, és a fermentáció első 10 órája alatt sebességét 400 ford/perc értékre növeljük. A hőmérsékletet 34°C-on tartjuk. A fermentációt 60 órán át végezzük, ez alatt a pH érték 6,64-ről 8,0 értékre növekedik. Ezután a fermentor tartalmát lehűtjük, és a mícélumot centrifugé lássál elválasztjuk. A felúszó folyadékot analizáljuk, a lipáz aktivitás 90 LU/ml. 17. példa A példában bemutatjuk az enzimes mosószer adalékanyag aktív hatóanyagának félüzemi fermentorban való előállítási eljárását. A lipázt Fusarium oxysporum DSM 2672 elárasztott aerob fermentációjával állítjuk elő. Az agar-agar táptalajt Fernbach lombikban az alábbi alkotórészekből készítjük: Difco élesztő extraktum 4 g KjHPO, I g Mgso4.7HjO 0,6 g glükóz g deszülált víz 1000 ml Merck agar-agar 15 g Az elegyet 40 percen át 121°C-on sterilizáljuk, A táptalajt YPG-agar táptalajnak nevezzük. DSM 2672 törzset tenyésztettünk SO'C-on egy héten át YPG-agar táptalajon. A kenet spóráit sterilizált, lefölözött tejben szuszpendáljuk és a szuszpenziót ampullákban liofillzóljuk. A liofilizált ampuHatartalmat Pernbach lombikba visszük át, és a lombikot 30°C-on 1 héten át inkubáliuk. 500 literes oltó fermentorban az alábbi táptalajt készítjük el: CaCOj 1.5 kg glükóz 7,2 kg búza áztató folyadék 7,2 kg habzásgátló pluronic 30 ml körülbelül 240 liter teljes térfogatig vizet adunk az elegyhez, A pH érléket a kalcium-karbonát beadagolása előtt, körülbelül 5,5 értékre állítjuk be. A táptalajt 1 órán át l2Í°C-on fermentorban gőzzel sterilizáljuk. A végtérfogat körülbelül 300 liter körüli érték. A Fernbach lombik spóra szuszpenzióját a beoltó fermentorba visszük át. Az oltó fermentáció körülményei az alábbiak: Fermentor-típus: szokásos levegőztetett és kevert fermentor, magasság/ /átmérő arány körülbelül 2; Keverés: 300 ford/perc (két turbina impeller); Levegőztetés: 300 1 normál levegő/perc; Hőmérséklet; 30°C Nyomás: 0,5 alt Idő: körülbelül 17 óra A túlzott habzás elkerülése érdekében a levegőztetés és keverés mértéke csökkenlhető. Ebben az esetben a beoltó fermentáció során ezt nem alkalmaztuk. Miután 1/2—1 nap,' esetünkben 17 óra, után jó tenyészetet kapunk, énnek 2t> literét a beoltó fermentorból a fő fermentorba inokuláljuk. 5
