193936. lajstromszámú szabadalom • Fusarium oxysporum lipázt tartalmazó mosószer adalékanyag
193936 A találmány tárgya enzimes mosószer adalékanyag, mely enzimként Fusarium oxysporum lipázt tartalmaz. Az utóbbi évtizedekben az enzimes adalékanyagok területe igen nagy fejlődésen ment keresztül. Például Claus Dambman, Poul Holm, Villy Jensen és Mogens Hilmer Nielsen, a Society for Industrial Microbiology, American Institute of Biological Sciences, Washington, D.C. 1971, kiadványában, a Developments in Industrial Microbiology 12. kötetében „How Enzymes Got into Detergents" címmel összefoglaló cikket közölt az ilyen irányú eredményekről és kutatásokról. A legáltalánosabb enzimes mosószer adalékanyagok proteolitikus adalékok, de lipolitikus adalékokat is leírtak, például a 4,011,116 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 4. oszlop 65. sorától az 5. oszlop 68. soráig, valamint az 1,293,613 számú brit szabadalmi leírás 2. oldalán a 6-29 sorokban. Ugyancsak átfogó cikket közölt Hans Andrée és munkatársai a Journal of Applied Biochemistry, 2, 218-229 (1980) folyóiratban lipázok mosószer adalékanyagként való felhasználásáról „Lipases as Detergent Components" címmel. Amennyiben a mosást magas hőmérsékleten és erősen lúgos közegben végezzük, a szennyezést tartalmazó zsír elszappanosítás révén oldódik fel. Azonban az energiaszegénység miatt általában az alacsony hőmérsékleten (60°C körül és ez alatt) végrehajtott mosási eljárások előnyösebbek, és ezen hőmérsékleten az ismert lipázok a szennyezést tartalmazó zsírnak csak egy részét képesek oldatba vinni. Valamely lipolitikus enzim mosószer adalékanyag hatékonyságát alkalmasan a 101. (olivaolaj/gyapot) és 102. (olívaolaj/gyapjú) számú EMPA (Eidgenössische Material-prüfungs und Versuchsanstalt, St. Gallen, Switzeland) mintákkal,a 1,361,386 számú brit szabadalmi leírás (4.és 7.oldal) és a 3,723,250 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (15-19. oldal) szerinti eljárás alkalmazásával állapíthatjuk meg. Ezen a módon, az AR átoldási tényező alapján megállapították, hogy az ismert lipolitikus enzim mosószer adalékanyagok gazdaságos mennyiségben alkalmazott mosóoldat lipáz aktivitás mellett viszonylag alacsony, nem kielégítő lipolitikus tisztítóhatással rendelkeznek. A találmány tárgya jelentősen jobb lipolitikus tisztító hatással, azaz gazdaságos menynyiségben alkalmazott mosóoldat lipáz aktivitás mellett jelentősen magasabb átoldási AR értékkel rendelkező lipolitikus mosószer adalékanyag. A találmány lényege, hogy az adalékanyag lipáz Fusarium oxysporum eredetű. A Fusarium oxysporum fajok meghatározása az évtizedek során valamennyire változott. A találmány szerinti eljárás leírásában a „The Genus Fusarium," C.Booth, CMI, 1971, által megadott definíciót alkalmazzuk. 1 2 Bizonyos Fusarium oxysporum törzsek lipáz termelését különböző közleményekben leírták, például az Agric. Biol. Chem. 43/10 (1979), 2126, 1.táblázatban Fusarium lini lipázt említenek (a fenti definíció szerint a Fusarium lini a Fusarium oxysporumhoz tartozik) és az Indián Journal of Experimental Biology, Vol. 11. (1973), 37-39., közlemény cime „Lipids and Lipase Activity in Strains of Fusarium vasinfectum" (a fent megadott definíció szerint a Fusarium vasinfectum most a Fusarium oxysporumhoz tartozik). Bár néhány Fusarium oxysporum törzs alacsony lipáz termelő képességgel rendelkezik, a találmány szerint alkalmazható lipázt termelő Fusarium oxysporum törzsek olyanok, amelyeknek termelése nagyobb mint 10 LU/ /ml az alábbi körülmények alkalmazása mellett: a rázóedényenként számított táptalajt az alábbi adalékanyagokból készítjük (g/1): 2 szójabab liszt 45 glükóz 70 kh2po4 2 Na2HP04 3 szója-olaj 5 A sterilizálást 40 percig 121°C-on végezzük. 100 ml táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot inokulálunk olyan spórákkal, amelyeket egy előzőleg lipáztermelés tesztelésre kiválasztott Fusarium oxysporum törzzsel inokulált agar-agar táptalaj-kenetről veszünk. A lombikot 30°C-on, 5 napon át, 230 ford/perc sebességgel rázatjuk, majd a lipáz termelést meghatározzuk. Az eljárást részletesen a 29. példában ismeretjük. Azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti mosószer adalékanyag igen nagymértékben megnövekedett lipolitikus tisztítóhatást mutat, amely a találmány szerinti eljárás később leírt példa adataiból is kitűnik. A DSM 2672. ATCC 7808, CBS, 620.72, CBS 645.78 és CBS 794,70 Fusarium oxysporum törzsekkel kapcsolatban megállapítottuk, hogy pH aktivitás optimum 9-11 közötti, és az átlagos hőmérséklet aktivitás optimumok körülbelül 35-50°C közötti érték (az analízis ideje 20 perc). A DSM 2672 lipázból nyert antitestekkel végrehajtott keresztezett immunoelektroforézis alapján megállapítottuk, hogy a fenti öt törzs megegyező vagy részben megegyező. Ennek alapján megállapítható hogy a találmány szerinti eljárással előállított enzimes mosószer adalékanyag aktív komponense közeli lipáz enzimek csoportja. A lipáz aktivitást a NOVO módszer szerint határoztuk meg, A módszer az enzim által végzett tributirin hidrolízisen alapszik. A felszabadított butánsav mennyiségét nátrium-hidroxiddal történő titrálás segítségével határoztuk meg. Egy NOVO lipáz egység (LU) az az enzim mennyiség, amely állandó pH és az alábbiakban leírt standart reakciókörülmények mellett 1 mikromól nátrium-hidroxidnak megfelelő butánsavat szabadít fel percenként. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
