193928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bbm-1675 jelű daganatellenes hatású antibiotikumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193928 A H964-92 törzs tisztított sejtfala mezo-diamino-pimelinsavat tartalmaz, de hiányzik belőle a glicin. A teljes sejt hidrolizátumában maduróz (3-0-metil-D-galaktóz), glükóz és ribóz vannak jelen. A sejtfal aminosavja és a teljes sejt cukor komponensei arra mutatnak, hogy a H964-92 törzs a Ills sejtfal típusba tartozik. Két menokinon komponens volt nagyobb mennyiségben azonosítható: az MK-9(H6) és az MK-9(H8). Rendszertani besorolás szempontjából a H964-92 törzs lényegesebb jellemzői: (1) a légspórák láncai: rövidek, egyenesek, kacskaringósak vagy kampósak; (2) a spórák felülete szemölcsös; (3) a légmicélium némely táptalajon rózsaszínes; (4) diffundálható pigmeneteket nem képez; (5) mezofil; (6) 111 b típusú sejtfala van; (7) menakinon rendszere: MK-9(H6) és MK-9(H8). E főbb jellemzők azt mutatják, hogy a H964-92 törzs az Actinomadura nemzetségbe sorolható. Az Actinomadura nemzetség korai fajtáit emlősökből különítették el. Bizonyos törzseket növényi anyagokból is nyertek. Mindezek mellett az újabban talált fajták közül sokat a talajból különítették el. A Goodfellow et al. által (J. Gen. Microbiol. 112, 95-111 (1973)) az Actinomadura nemzetségről és a rokon sugárgombákról leközölt neumerikus rendszertan és áttekintés szerint, a talaj-eredetű Actinomadura fajták legtöbbjét a 14 leírt csoport közül a 7.-be lehet besorolni. A H964- -92 törzs a 7. csoport fajtáival nagyon közeli rokonságban áll. Nonomura és Ohara (J. Fermen. Technoi. 49, 904-912 (1971)) az Actinomadura nemzetség öt szaprofita fajtájáról számolt be és Nonomura (J. Ferment. Technoi. 52, 71-77 (1974)) és Preobrazsenszkaja és munkatársai. (Actinomyces and Related Organisms 12, 30-38 (1977)) közzétették az Actinomadura nemzetség azonosításához és rendszertani besorolásához szükséges kulcsokat. 30 különféle fajta leírásával való összehasonlító vizsgálat nyomán, melyek között szabadalmakban kinyilvánítottak is voltak, a H964- -92 törzs nagyon hasonlónak tűnik a fentebb idézett irodalmi közleményben Preobrazsenszkaja és munkatársai által leírt Actinomadura coerulea-hoz és a Nonomura által a fentebb ugyancsak idézett közleményben leírt Actinomadura verrucososporahoz. A H964-92 törzset közvetlenül összehasonlítottuk az A. verrucosospora KKC A-0147 jelzésű törzzsel,és azt találtuk, hogy az az A. verrucosospora törzzsel morfológiai, tenyésztési és élettani jellemzők szempontjából nagyon szoros rokonságban áll. így a H964-92 törzs az Actinomadura verrucosospora faj egy új törzseként osztályozható. Magától értetődő, hogy a BBM-1675 termelése szempontjából a jelen találmány, noha részletekbe menő leírást tartalmaz egy sajátos Actinomadura verrucosospora törzs, a H964-92 (ATCC 39334) törzs és ennek mutánsa, az A1327Y (ATCC 39638) törzs tekinteté11 ben, nem korlátozódik e mikroorganizmusokra vagy azokra a mikroorganizmusokra, amelyek az itt kinyilvánított tenyésztési jellemzők tekintetében teljes leírást nyertek. Különleges szándékunk az, hogy a találmány a H964-92 törzset és annak minden olyan természetes variánsát és mutánsát felölelje, amelyek természetes és mesterséges BBM-1675 vegyületeket termelnek. A találmány szerinti BBM-1675 jelzésű antibiotikumok az Actinomadura verrucosospora bármely BBM-1675 antibiotikumokat termelő törzsének, előnyösen egy olyan Actinomadura verrucosospora törzs tenyésztésével állíthatók elő, amelyeket az ATCC 39334 vagy az ATCC 39638 törzs jellemzői azonosítanak, vagy ezek egy mutánsának tenyésztésével, valamely szokványos vizes táptalajon. Az organizmus minden olyan táptalajon tenyészthető, amely a sugárgombák számára ismert tápanyagíorrásokat tartalmazza, így különféle szén- és nitrogén-források használhatók fel, s ezeken kívül kívánság szerinti szervetlen sókat és ismert növekedési faktorokat is felhasználhatunk. Az antibiotikum nagy' mennyiségének termeléséhez süllyesztett aerob tenyésztési módszer előnyösen alkalmazható, noha korlátozott mennyiség termelésére felületi tenyészetek vagy palackok ugyancsak alkalmazhatók. A jelen találmány szerinti eljárásban mindazon műveletek alkalmazhatók, amelyek más sugárgombák tenyésztésénél alkalmazásra kerülnek. A táptalajnak tartalmaznia kell egy olyan megfelelően felszívódó szén-forrást, mint a glicerin, L(-p)-arabinóz, D-xilóz, D-ribóz, L-ramnóz, D-glükóz, D-fruktóz, szacharóz, cellobióz, oldható keményítő, D-mannit vagy inozit. Nitrogén-forrásként ammónium-klorid, ammónium-szulfát, karbamid, ammónium-nitrát, nátrium-nitrát, stb. jöhet szóba, akár egyenként, akár pedig olyan szerves nitrogénforrással kombinálva, mint pepton, húskivonat, élesztőkivonat, kukoricalekvár, szójaliszt, gyapotmagliszt, stb. A táptalajhoz hozzáadható még, amennyiben szükséges, néhány szervetlen só, mint nátrium-, kálium-, kalcium-, ammonium-, foszfát-, szulfát-, klorid-, bromid-, karbonát-, cink-, magnézium-, mangán-, kobalt-, vas-só és hasonlók. A BBM-1675 antibiotikumok termelése minden olyan hőmérsékleten kivitelezhető, amely a termelő organizmus kielégítő növekedéséhez vezet, így pl. 15°C és 45°C között, és alkalmasan 27°C és 32°C között. Általában a legjobb kitermelés 68-180 óra közötti tenyészidő alatt érhető el, attól függően, hogy rázópalackos, uborkásüveges vagy tartályos fermentációt alkalmazunk. Amennyiben tartályos fermentációt kell kiviteleznünk, kívánatos, hogy előbb egy inokulumot állítsunk elő azáltal, hogy a termelő organizmust megfelelő oltóanyaggal a kívánt táptalajba oltjuk. Miután ily módon aktív inokulumot nyertünk, ezt átoltjuk — aszeptikus körülmények között — a 12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
