193928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bbm-1675 jelű daganatellenes hatású antibiotikumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193928 fermentációs tartály táptalajába. Az antibiotikum-termelés előrehaladását papírkorongos agardiffúziós módszerrel követhetjük, teszt organizmusként Staphylococcus aureus 209P törzset használva. A fermentáció befejeztével a BBM-1675 vegyületcsoport a fermeptléből szokványos elkülönítési eljárásokkal nyerhető ki, mint pl. folyadékextrakció. így pl. az egész fermenilé micélium szürőpogácsává és felülúszó fermentlére különíthető el, szűréssel vagy centrifugálással. A szűrőpogácsában maradt antibiotikum úgy nyerhető ki, hogy azt metanolban szuszpendáljuk, és a metanolos kivonatot betöményítjük. A fermentlé felülúszó részében található aktív anyagokat n-butanolos extrakcióval nyerhetjük ki. A fentebb említett n-butanolos és metanolos kivonatokat egyesíteni is lehet,és azeotróp desztillációval olyan vizes oldatot nyerünk maradékként, amelyből az aktív antibiotikumok olajos szilárd anyagként kiválnak. A szilárd anyagot metanolban oldjuk és szűrünk. A szűrletet betöményítjük és etil-acetát-víz elegyhez adjuk. A nyert szerves kivonat tartalmazza a nyers BBM-1675 komplexet, amely kicsapható az oldatból, valamely azt nem oldó szer, például n-hexán hozzáadásával. A nyers BBM-1675 vegyületcsoport több alkotórész elegye, amelyek közül a fő bioaktív 13 komponensek a BBM-1675 A, és A2,és a négy kevésbé bioaktív komponens a BBM-1675 A3, A4, B, és B2. E bioaktív komponensek szokványos kromatográfiás eljárásokkal elkülönít- 5 hetők és tisztíthatok. Az egyik eljárás szerint a nyers BBM-1675 komplexet előbb metanolban oldjuk, majd Sephadex LH-20 oszlopkromatográfiával tisztítjuk metanollal eluálva. E részlegesen tisztított komplex tovább tisztít- 10 ható szilikagél oszlopon végzett kromatográfiával, és ezt követő lépésenkénti eluálással kloroformot és növekvő koncentrációban metanolt használva. Az eredmény: BBM-1675 A,, BBM-1675 A2, Ag és A4 elegye és BBM-1675 15 Bi és B2 elegye. Az A, komponens Sephadex LH-20 oszlopkromatográfiával és metanolos eluálással még tovább tisztítható. Az A2, A3 és A4 elegyét Bondapak C18 oszlopon (Waters Associates, Inc.) kromatografálva választ- 20 hatjuk szét az eluálást növekvő koncentrációjú vizes aceto-nitril oldattal végezve. A B, és B2 komponensek elegyét szilikagél oszlopkromatográfiával választhatjuk szét eluáló oldószerként kloroform és metanol elegyét hasz- 25 nálva. Az előnyös kromatográfiás elválasztási eljárásokra vonatkozó további részletek a kiviteli példákban találhatók. A BBM-1675 vegyületcsoport hat bioaktív 30 komponensét két vékonyrétegkromatográfiás eljárással különböztethetjük meg egymástól, amint azt a IV. táblázat szemlélteti. 14 IV. Táblázat A BBM-1675 komplex komponenseinek vékonyrétegkromatográfiája - Rf értékek Komponens Szilikagél Ci8 fordított fázisú szi-CHCI3-CH3OÍI/5:1 likagél tf/tf CH3CN-H2O/75:25 tf/tf BBM-1675 Ai 0,74 0,18 BBM-1675 A2 ö; 71 0,21 BBM-1675 A3 0,72 0,28 BBM-1675 Ai* 0,71 0,78 BBM-1675 Bi 0,63 0,23 BBM-1675 B2 0,60 0,16 A BBM-1675 A2, A3 és A4 elválasztása közönséges fázisú vékonyrétegkromatográfia rendszerekkel nehéz volt, de megoldható volt fázisfordításos vékonyrétegkromatográfiával. Az egyedi BBM-1675 komponensek egymáshoz hasonló oldhatóságot és szinreakciókat mutatnak. Például oldhatók kloroformban, etil-acetátban, acetonban, etanolban és metanolban, gyengén oldódnak benzolban és 65 8 vízben,és oldhatatlanok n-hexánban és széntetrakloridban. Pozitív reakciót adnak ferri-kloriddal, Ehrlich és Tollen reagensekkel, de válaszuk negatív a Sakaguchi, ninhidrin és antron reakciókra. A BBM-1675 komplex komponenseinek jellemző fiziko-kémiai tulajdonságait az V. táblázat foglalja össze.
