193911. lajstromszámú szabadalom • Eljárás magas biológiai aktivitású antimicin-a komplex előállítására
193911 A találmány tárgya eljárás magas biológiai aktivitású antimicin-A komplex előállítására mikrobiológiai úton. Ismeretes az irodalomból, hogy különféle Streptomyces törzsek egy több komponensből álló, antimicin-A-nak elnevezett antibiotikum komplexet szintetizálnak. (Phytopathology 14, 438-446, 1954). Az antibiotikum keverék, antimicin A0, A,, A2, A3, A4, A5 és A6 komponenseket tartalmaz. Ezen komponensek kémiailag egy 9 tagú dilakton gyűrűt és amid kötésben 3-íormamino-szalicilsavat tartalmazó, gombaellenes hatású vegyűletek. Liu W. és Strang F.M. (J. Am. Chem. Soc. 81, 4387-89, 1959), valamint Harada Y. (J. Antibiotics, Sr. A II, 32-36, 1958) azt találták, hogy az A3 komponens többszörösen aktívabb, mint az A, komponens. Bár az antimicin régóta ismert antibiotikum, szélesebb körű gyakorlati alkalmazására csak az elmúlt években került sor. A halakra gyakorolt szelektív toxicitása miatt halastavak törzsállománnyal történő betelepítése előtt a nem kívánatos halállomány kipusztítására használják. Ezen túlmenően az antimicin — mint az aerob légzési folyamatok szelektív gátló szere — mint biokémiai reagens kerül felhasználásra, különösen a légzési folyamatok vizsgálatánál. Az antimicint a szakirodalom tanulsága szerint kizárólag Streptomyces törzsek termelik, így pl. a S.kitazavaensis, a S.griseus, a S.blastomyceticus és az NRRL 2288 jelzésű, nem azonosított Streptomyces törzs (3 746 623 sz. Amerikai Egyesült Államokbeli szabadalmi leírás). Vizsgálataink során meglepően azt találtuk, hogy egy földmintából általunk már korábban izolált sugárgomba törzs magas szinten képes az antimicin-A komplex termelésére, s a -magas termelési szint következtében az antimicin-A komplex elkülönítése viszonylag egyszerűnek és gazdaságosnak bizonyult. Továbbá azt találtuk, hogy a termelt antimicin-A komplex összetétele eltér a szakirodalomban eddig publikált antimicinkomplex összetételétől. A fenti törzs által termelt antimicin-A komplex gyakorlatilag csak a hatékony A3-at és az A4-et tartalmazza, 54, illetve 41 %-ban. A kisebb hatású A0, A,, A2, As és Ag komponensek csak elenyésző mennyiségben vannak jelen. Valószínűleg ez az oka a nagyobb biológiai aktivitásnak. Biológiai méréseink szerint a találmány szerint előállított antimicin-A komplex aktivitása 116% összehasonlítva a standard (Serva) antimicin-A komplexszel, amely az A3 komponenst 43 %-ban és az A4 komponenst 8 %-ban tartalmazza. Az általunk izolált sugárgomba törzset 1984. június 26-án MNG 00286 szám alatt az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében letétbe helyeztük, s a "Schierling, B.E., D.Gottlieb: Methods Manual International Coope-1 2 rative Project for Description and Deposition of Type Cultures of Streptomyces" (Delaware, Ohio 1964) követelményeinek megfelelően az alábbiakban írjuk le: E sugárgomba törzs szintetikus táptalajokon lassan induló, komplett természetes táptalajokon gyorsan kezdődő, jó növekedést mutat. Jó növekedés esetén barna-világosbarna-vörösbarna oldódó pigmentet termel. A szubsztrát-micélium színe barna-vörösesbarna, a spórázó légmicélium a "Yellow" (illetve nem teljesen érett állapotban a „Red") series-be tartozik. A spóratartók morfológiailag a következő megoszlást mutatják: 3-4 % rectus, 25-30 % verticillatus rectus, 65-70 % biverticillatus rectus. Az organizmus különböző táptalajokon, 28 °C-on a következőképpen növekedik: Nutrient agar: gyenge növekedés, porszerű szürkésvörös légmicélium, barna szubsztrát-micélium, barna oldódó pigment. Glükóz-aszparagin agar: igen gyenge növekedés, porszerü légmicélium, világosbarna szubsztrát-micélium, világossárga oldódó pigment. Zabpehely agar: Éretlen állapotban szürkésvörös, éretten sárga légmicélium, vörösesbarna szubsztrát-micélium, világosbarna oldódó pigment. Szacharózos Czapek agar: gyenge növekedés, a spórásodé légmicélium fehér. Zselatinon szúrási tenyészetben (22°C-on): közepes erősségű növekedés,elfolyósodás,barna oldódó pigment termelődik. Melanoid pigment-termelés vaspepton agaron igen gyenge. A fenti sugárgomba törzs Pridham T.G. és Gottlieb P. módszerével vizsgálva (J.Bacteriol. 56, 107, 1948) jól növekszik glükózon és inoziton. Lassan nő (gyengén pozitív) íruktózon. Növekedést nem biztosít: szorbit, xilóz, dulcit, arabinóz, ramnóz, szacharóz, raffinóz, mannit. A törzs a fenti bélyegek alapján a Streptoverticillium hiroshimense fajjal azonosítható. E faj ISP 5037 jelű típustörzsével teljes hasonlóságot mutat. A Streptoverticillium hiroshimense törzs morfológiai és biokémiai tulajdonságaiban határozottan eltér valamennyi eddig ismert antimicin-termelő törzstől. A Streptoverticillium genus-ról egyébként antimicin-termelést ezideig nem írtak le. Az antimicint termelő Streptoverticillium hiroshimense törzs tenyésztésére a sugárgombák tenyésztésére szolgáló általánosan szokásos módszereket alkalmazhatjuk. A te-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
