193870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a digitális lanata primer glikozidjainak szekunder glikozidokká történő átalakítására
A A találmány tárgya eljárás a Digitalis lanata primer glikozidjainak szekunder glikozidokká történő átalakítására Helix pomatia (éticsiga) enzimjeinek alkalmazása útján. A szívgyógyszerek igen értékes családját alkotják azok a vegyületek, amelyek különféle hatóanyagait a Digitalis növényből állítják elő. így például átalakítás nélkül tisztított alakban alkalmazzák hatóanyagként a növényben lévő primer glikozidot, a lanatozid-C-t, a kiindulási glikozidból a terminális glükózcsoport lehasításával kapott acetil-digoxint, a kiindulási anyagból az acetilcsoport lehasításával előállított dezacetil-lanatozid-C-t, végül kiemelkedően értékes gyógyszer készül a digoxin hatóanyagból, amelyet úgy kapnak, hogy a lanatozid-C-ről mind az acetilcsoportot, mind a terminális glükózcsoportot lehasítják. A digoxinhoz hasonló módon állítható elő a lanatozid-A-ból a digitoxin, valamint a lanatozid-B-ből a gitoxin. A nem kívánt csoportok lehasítására különféle eljárásokat dolgoztak ki. Az ismert eljárások döntő többségének közös jellemzője, hogy egymástól elkülönülő külön fázisban, gyakran külön lépésben végzik egyfelől a terminális glükózcsoport lehasítását, másfelől a dezacetilezést. A különböző fázisban kialakuló termékelegyek szétválasztására és az egyes elkülönített termékek lépésenkénti tisztítása sok nehézségekkel jár, az eljárás viszonylag hosszantartó és bonyolult. Az alkalmazott kémiai átalakítások a savas, illetve a lúgos hidrolízisek, számos mellékreakciójával járnak, pl. az aglükon rész izomerizációjával az aglükon és az első digitoxóz-cukor közti kötés elhasadásával. Ismeretes különböző enzimpreparátumok alkalmazása is. Több eljárásnál (pl. 110 163 sz. magyar szabadalmi leírás) katalizátorként a Digitalis levélben jelenlévő erjesztő anyagokat hasznosítják. A glükózcsoportok lehasítására javasolták valamely csiga emésztőrendszerében lévő enzim preparálását és abból készített kivonat katalizátorkénti alkalmazását. H. Huber és mtsai pl. a Helix pomatia (éticsiga) emésztőrendszeréből nyert enzim alkalmazásával uzarint alakítottak uzarigeninné, Okano és mtsai az Euhadra quaesita csiga emésztőrendszeréből nyert enzim alkalmazásával deglükolizáltak Digitalis lanata magból izolált gitoxint, illetve digitalint. Huber és mtsai a Helix pomatia emésztőrendszeréből vett enzim afkalmazásával lehasították az aglükon-részhez kapcsolódó két glükózegységet [Helv. Chim. Acta 34, 46. (1951)]. Okano és mtsai Digitalis lanata magból izolált és kémiailag acetilezett glikozidok dezacetilezését is enzimkatalitikus módszerrel végezték, ehhez a már említett Euhadra quaesita emésztőrendszerét alkalmazták [Pharm. Bull., Tokyo, 5, (1957) 167]. Coker és mtsai a Ghánában honos Bulinos globulosus csigákból nyertek észteráz aktivitású extraktumokat. [Ghana. J. Sei. (1974), 141 19] 1 2 Az eddig ismertetett megoldásoknál azonban egy adott lépésben mindenkor csak egy meghatározott reakciót végeztek: vagy à glükózcsoportot hasították le, vagy dezacetileztek. További hátránya az utóbbi megoldásnak, hogy az emésztő traktus kiemelése a csiga testéből kényes, bonyolult, hosszantartó manuális műveleteket igényel [Huber és mtsai: Helv. Chim. Acta XXXIV, Fasciculus I (1951), No. 7., 68-69] , A lanatozid sorbeli vegyületek bontására ajánlották már egyes gombaféleségekből nyerhető enzimpreparátumok alkalmazását is [Helv. Chim. Acta, XXXIV, (1951), 397 és 782; 108.046 sz. csehszlovák szabadalmi leírás] . A legkorszerűbb eljárást a 175 601 sz. magyar szabadalmi leírás ismerteti, amelyben Streptomyces griseolus tenyészetéhez vagy sejtpreparátumának szuszpenziójához 5 mg/ /ml koncentrációban primer glükozidokat adnak, és ezen az úton 83-85% termeléssel, egy lépésben szekunder glükozidokat kapnak. A mikroorganizmus tenyészet előállítása steril körülményeket, ennek megfelelő berendezéseket és hosszú időt igényel, továbbmenőleg csak a már kipreparált tiszta primer glikozidok szekunderezésére alkalmas. Találmányunk célkitűzése olyan új eljárás kidolgozása, amelyben — az átalakítás kedvezőbb reakciókörülmények között közvetlenül a levél homogenizátumban is végrehajtható, mimellett — az átalakulás mértéke legalább az ismert eljárásokkal azonos. Kísérleteink során azt találtuk, hogy ha a primer glikozidokhóz vagy a Digitalis növényhez, előnyösen a teveléhez a Helix pomatia teljes testéből közvetlenül készített enzimkatalizátor készítményt adunk, akkor — a kétféle katalitikus aktivitást, nevezetesen egyfelől az enzimkatalizátor készítmény, másfelől a D. lanata növény katalitikus hatását együtt hasznosíthatjuk, és így a célterméket az ismert megoldásokhoz képest egyszerűbb és rövidebb folyamatban kapjuk.. — javul az átalakulás mértéke (közel 100%), és ezért — primer glikozidok átalakítása esetén nincs szükség járulékos elkülönítési műveletre. A találmányunk szerinti eljárásban alkalmazott Helix pomatia katalizátor készítményt oly módon állítjuk elő, hogy a csigát kívánt esetben megfosztjuk a házától, majd vízben erőteljes keverés mellett finomra őröljük. Lényeges, hogy friss vagy mélyhűtött csigát használjunk fel, ugyanis az elpusztúlt, megfeketedett csigában csökkennek vagy teljes mértékben el is bomlanak az enzimek. Az őrléshez előnyösen nagy fordulatszámú berendezést alkalmazunk (például ETA-012 típusú, 10.000 fordulatszámú mixert). A csiga, illetaoo 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
