193850. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán ampulla belsejében történő leválasztására
193850 A találmány tárgya eljárás 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánnak ampulla belsejében történő leválasztására. A mitomicin C antibiotikumot fermentálással állítják elő, és jelenleg felhasználják a gyomor vagy a hasnyálmirigy szétszórt adenokarcinomájának gyógyításánál, más, engedélyezett kemoterápiás szerekkel kombinálva, és tüneti kezelések céljára, ha más módszerek sikerteleneknek bizonyultak [Mutamycin® Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians’ Desk Reference, 38 th Edition, 1984, p. 750], A mitomicin C antibiotikumot és fermentálással történő előállítását a 3 660 578 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti, amelyet 1972 május 2-án engedélyeztek, és amelynek az elsőbbsége korábbi bejelentések, közöttük egy Japánban 1957 április 6-án benyújtott szabadalmi bejelentés elsőbbségének felel meg. A mitomicin A, B és C, valamint a porfiromicin szerkezetét először a Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company kutatói, J.S.Webb és munkatársai publikálták [J.Amer. Chem. Soc., 84, 3185-3187 (1962)]. A szerkezetkutatás során alkalmazott egyik kémiai átalakításnál a mitomicin A és a mitomicin C közötti kapcsolatot úgy igazolták, hogy az előbbit, amely 7,9a-dimetoxi-mitozán, ammóniával az utóbbivá, 7-amino-9a-metoxi-mitozánná alakították. A mitomicin A 7-es helyzetű metoxicsoportjának az átalakítása fontos reakciónak bizonyult a daganatellenes hatású mitomicin C származékok előállításánál. Az alábbi szakcikkek ismertetik a mitomicin A átalakítását daganatellenes hatású, a 7-es helyzetben szubsztituált-amino-csoportot tartalmazó mitomicin C származékká: Matsui és munkatársai, The Journal of Antibiotics, XXI, 189-198 (1968); Kinoshita és munkatársai, J. Med. Chem., 14, 103-109 (1971); Iyengar és munkatársai, J.Med.Chem., 24, 975-981 (1981); Iyengar, Sami, Remers és Bradner, Abstracts of Papers — Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, March, 1982, Abstract No. MEDI 72; Sasaki és munkatársai, Internat. J. Pharm., 15, 49 (1983). Az alábbi szabadalmi leírások 7-es helyzetben szubsztituált amino-mitozán-származékok előállítását ismertetik mitomicin A, mitomicin B vagy ezek egy Nla-szubsztituált származéka és primer vagy szekunder amin reakciójával: Cosulich és munkatársai, 3 332 994 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1967 július 25-én; Matsui és munkatársai, 3 420 846 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1969 január 7-én; Matsui és munkatársai, 3 450 705 sz. amerikai egyesült álla- 2 1 mokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1969 június 17-én; Matsui és munkatársai, 3 514 452 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1970 május 26-án; Nakano és munkatársai, 4 231 936 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1980 november 4-én; Remers, 4 268 676 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, engedélyezve 1981 május 19-én. A 7-es helyzetben helyettesített aminocsoportot tartalmazó mitomicin C származékokat irányított bioszintézissel is előállítottak: a fermentléhez primer aminokat adtak, majd elvégezték a szokásos mitomicin-fermentálást [C.A. Claridge és munkatársai, Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology, 1982, Abs. 028], A 896 963 sz. belga szabadalmi leírás olyan új monoguanidíno- vagy mono- és bisz-amidino-mitomicin C analógokat ismertet, ahol a mitomicin C 7-amino-csoportjának nitrogénatomja és/vagy a 10-helyzetű karbamoil-oxi-metil-csoport nitrogénatomja egy amidino-szubsztituens részét képezi, vagy a 7-amino-csoport nitrogénatomja egy guanidinocsoport része. Az egyik ilyen vegyület az (I) képletű 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán, amelyet a fenti belga szabadalmi leírás 8. és 15. példájában ismertetett módon állítottak elő. Ez az amorf szilárd anyagként képződő vegyület igen hatékony a P-388 leukémiával szemben egéren és patkányon, meghaladva a mitomicin C hatékonyságát mind a maximális hatás, mind pedig a tömegegységre számított aktivitás tekintetében (összehasonlítva az azonos hatás eléréséhez szükséges dózisok nagyságát). Ez az amorf vegyület azonban általában instabil 25-56°C közötti hőmérsékleten. Mindeddig nem állt rendelkezésre alkalmas módszer, amellyel ezt a vegyületet dózisegységnyi mennyiségben steril ampullába juttathatjuk és ott olyan alakban tarthatjuk, amely parenterálisan beadható közeggel gyógyászati készítménnyé alakítható. Tekintettel arra, hogy a 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) - -9a-metoxi-mitozán rendkívül csekély mennyiségeit alkalmazzuk az egységnyi dózisú gyógyászati készítményekben, és a vegyület rendkívül toxikus, nem kívánatos a vegyület nagy tömegben, azaz száraz por alakjában való kezelése. Továbbá, mivel a vegyület vízben instabil, vizes oldatai nem használhatók fel arra, hogy a vegyület dózisegységnyi mennyiségét steril ampullába juttassuk. Azt találtuk, hogy a 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt egységnyi dózisú steril alakban választhatjuk le ampullában olymódon, hogy e vegyület tercier-butanollal készült oldatát steril ampullába töltjük, a tercier-butanolt ezután eltávolítjuk, például elpárologtatással vagy liofilizálással, majd az ampullát alkalmas módon, például dugó segítségével lezárjuk. Az így leválasztott anyag legfeljebb 0,5 mólekvivalens menynyiségű tercier-butanolt tartalmazhat hemi-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
