193850. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozán ampulla belsejében történő leválasztására
193850 szolvátként, és nagyon jól ellenáll hőbehatásnak. Parenterálisan beadható alkalmas vivőanyaggal összekeverve felhasználásra kész gyógyászati készítménnyé alakíthatjuk. A találmány szerinti eljáráshoz felhasznált 7- ( dimetil-amino-metil idén-amino) -9a-metoxi-mitozán amorf vagy kristályos lehet. Az amorf 7- (dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozánt a 896 963 sz. belga szabadalmi leírás 8. és 15. példája szerinti eljárásokkal állítjuk elő. Ezeket az eljárásokat az alábbiakban ismertetjük. A 896 963 sz. belga szabadalmi leírás 8. példája szerinti eljárás: 7- (dimetil-amino-metilidén-aminő) -N1 °- (dimetil-amino-metilidén) -9a-metoxi-mitozánt a következőképpen készítettünk: 500 mg (1,50 mM) mitomicin C 25 ml kloroformmal készített szuszpenziójához összesen 9,6 ml N,N-dimetil-formamid-dimetil-acetált adtunk (a reagáltatás kezdetén, majd 18, 21 és végül 23 óra elteltével 2,4 ml térfogatú részletekben), és a szuszpenziót 50 °C-on kevertük 41 órán át. Az oldószer és a reagens feleslegének lepárlása után sötétzöld maradékot kaptunk. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat (diklórmetán és metanol 20:1 arányú elegyének alkalmazásával) mitomicin C távollétét és két új, zöldszínű komponens jelenlétét mutatta (R/=0,16 és 0,22). A fő komponenst (R/ = 0,16) gyorskromatográfiásan különítettük el, eluálószerként diklórmetán és metanol 20 : 1 arányú elegyét használva. 340 mg (51,5%) zöld, szilárd anyagot kaptunk, amelyet dietiléterben oldottunk, az oldathoz hexánt adtunk, és sötétzöld, amorf por vált ki, amely 7-(dimetil-amino-metiüdén-amino) -N10- (dimetil-amino-metilidén) -9a-metoxi-mitozán volt. MMR spektrum (d5-piridin) delta-értékek: 2,18 (szingulett, 3H), 2,70 (széles szingulett, 1H), 2,76 (szingulett, 3H), 2,82 (szingulett, 3H), 2,86 (szingulett, 6H), 3,22 (szingulett, 3H), 3,30 (széles szingulett, 1H), 3,60 (dublett, J = 12 Hz), 4,1-2 (dublettekből álló dublett, 1H, J = 10 Hz és 4 Hz), 4,43 (dublett, 1H, J=12 Hz), 4,90 (széles szingulett, 1H), 5,10 (triplett, 1H, J=10 Hz), 5,52 (dublettekből álló dublett, 1H, J = 10 Hz és 4 Hz), 7,85 (szingulett, 1H), 8,64 (szingulett, 1H). Infravörös spektrum (káliumbromid-pasztilla) vmax-értékek: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230 és 1060 cm'1. Ultraibolya spektrum (víz) Amajc-érték: 390 és 244 nm. Analízis a C)2H28N605 képlet alapján: számított: C 56,71 % H 6,08 %, N 18,90 %: talált: C 56,20 %,H 6,28 %, N 17,88 %. 7- (Dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt az alábbiak szerint állítottunk elő: 600 mg (1,35 mM) 7-(dimetil-amino-metilidén-amino)-N’°- (dimetil-amino-metilidén) - -9a-metoxi-miíozán 10 ml metanollal készült oldatához 2,2 ml (10,8 mM) amino-difenil-3-metánt adtunk, és a kapott oldatot 4 órán át 54 °C-on kevertük. A reakció lefolyását vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal ellenőriztük, oldószerelegyként diklórmetán és metanol 90 : 10 arányú elegyét használva. 4 óra elteltével a kromatogramból eltűnt a kiindulási anyag (Rf = 0,35), és helyette egy új zöldszínű főfolt jelent meg (R/ — 0,29). Az oldatot ekkor csökkentett nyomáson bepároltuk, a visszamaradó szirupszerű anyagot gyorskromatografáiásnak vetettük alá 25 g szilikagélen, eluálószerként diklórmetán és metanol 20 : 1 arányú elegyét használva. A zöldszínű komponenst tartalmazó frakciókat (Rf=0,29) egyesítettük, vízmentes nátriumszulfáton szárítottuk és bepároltuk. Ilyen módon 215 mg (41 %) 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt kaptunk amorf, szilárd anyag alakjában. MMR spektrum (d5-piridin) delta-értékek: 2,18 (szingulett, 3H), 2,70 (széles szingulett, 1H), 2,80 (szingulett, 3H), 2,88 (szingulett, 3H),3,08 (széles szingulett, 1H),3,24 (szingulett, 3H), 3,56 (széles dublett, 1 H, J = 12 Hz), 4,00 (dublettekből álló dublett, 1H), 4,44 (dublett, ÍH, J = 12 Hz), 5,06 (triplett, 1H, J=10Hz), 5,56 (dublettekből álló dublett, 1H, J = 10Hz és 4 Hz), 7,58 (széles szingulett, 2H), 7,88 (szingulett, 1H). Infravörös spektrum (káliumbromid-pasztilla) vmQjr-értékek: 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, 1535, 1050 cm'1. Ultraibolya spektrum (víz) Ámű*-értékek: 390 és 226 nm. Analízis a Cl8H23N505 képlet alapján: számított: C 55,48 %, H 5,91 %, N 17,98 %: talált: C 54,83 %, H 5,67 %, N 16,90 %. A 896 963 sz. belga szabadalmi leírás 15. példája szerinti eljárás: 0,5 M koncentrációjú N,N-dimetil-klór-metilidén-iminium-klorid-oldatot készítettünk olymódon, hogy 1,57 g (12,5 mmól) oxalil-kloridot csepegtettünk 0 °C-on 915 mg (12,5 mmól) dimetilformamid 25 ml kloroformmal készült oldatához, majd a reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten kevertük. Ezzel egyidejűleg 5 ml dimetilformamidban oldott 334 mg (1 mmól) mitomicin C-t hozzáadtunk 3 ml dimetilformamidban szuszpendált 36 mg (1,5 mmól) nátriumhidridhez, szobahőmérsékleten 20 percig kevertük, majd —40 és —50 °C közötti hőmérsékletre hűtöttük, és hozzáadtuk a fenti N,N-dimetil-klór-metilidén-iminium-klorid-oldat 3 ml (1,5 millimól) mennyiségét. A reakcióelegyet 10 percig kevertük —40°C-on, hozzáadtunk további 18 mg (0,75 mmól) nátriumhidridet, és 1 órán át —40 °C-on tartottuk. Az elegyet ekkor diklórmetánnal hígítottuk, szűrtük, a szűrletet bepároltuk, és a maradékot vékonyréteg-kromatográfiásan kromatografáltuk szilikagélen, eluálószerként 10 % metanolt tártál-4 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
