193838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új fiziológiailag aktív vegyületek mikrobiológiai úton való előállítására
2. kísérlet Ez a kísérlet a Plipostatinok szuppreszszív hatásait mutatja be a limfocita-blaszt képződés reakciójára. A limfocita-blaszt képződés reakcióját a [3H]-timidin DNS szintézisbe való beépülésével kapcsolatban értékeljük konkanavalin A-val (a továbbiakban ConA) és E. coli OSS:B5 liposzacharidjával stimulált mind T-sejtek, mind B-sejtek révén. [Referencia: Menneki Jikken Sosaho, 2267—2276 oldal, The Japanese Society for Immunology (Japán Immunológiai Társaság). A T-limfocita blaszt képződés reakciójában a T-sejteket úgy nyerjük, hogy BALB/c egerek (19 hetesek) lépsejtjeit átengedjük egy poliamid (nylon) oszlopon, hogy eltávolítsuk az abszorbens sejteket, majd az így kapott lépsejteket műanyag Petri-csészében tenyésztjük egy órán át, hogy eltüntessük a megmaradó abszorbens sejteket. A T-sejtek tenyésztését Falcon mikrovizsgáló lemez üregeiben hajtjuk végre, RPMI 1640 tápközeget használva, amely még 20% borjuembrió szérumot, 25 ml Hepes puffért, 100 p, mól/ml streptomicint és 100 egység/ml G-penicillint tartalmaz. A T-limfocitákhoz (1.105) 5pg/ml ConA-t és BMG302-fF67 A! vagy Bt acil-peptidet adunk ebben a sorrendben az üregekbe, majd az említett tápközegből adunk az üregekbe, hogy a teljes térfogat 0,2 ml legyen. Az így létrejött keveréket 72 órán át inkubáljuk. A keveréket azután jelzéssel látjuk el olyan módon, hogy [3H]-timidinnel kezeljük 8 órán át, mielőtt a tenyésztést befejeznénk. A B-limfocita-blaszt képződést azonos körülmények között hajtjuk végre, mint fentebb, azzal a különbséggel, hogy a T-sejteket lépsejtekkel helyettesítjük, és 100 pg/ml LPS-t (lipopoliszacharid) alkalmazunk ConA helyett. A Plipostatin A, 100 p g/ml koncentrációnál elnyomja a [3H]-timidin beépülését a ConA-val stimulált T-limfocitákban és az LPS-sel stimulált B-limfocitákban 52%-kal, illetve 15%-kal. A Plipostatin B, szintén gátolja a T-limfocita-blaszt képződés ConA-val stimulált reakcióját és a B-limfocita-blaszt LPS-sel stimulált reakcióját 54%-kal, illetve 20%-kal. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a Plipostatinok olyan anyagok, amelyek képesek lefojtani a sejtek által közvetített immunitást normális állatokban. (3) A PCA reakció gátlása A Plipostatinok farmakológiai hatásaira vonatkozó tanulmányok azt mutatják, hogy ezek szuppersszív hatással bírnak a PCÂ (passzív bőr-anafilaxia) reakcióra. A következő kísérletek bemutatják a jelen találmány szerinti Plipostatin A, szuppreszszív hatását a PCA reakciókra. 3. kísérlet Ez a kísérlet a Plipostatin A, szuppreszszív hatását mutatja be PCA reakciókra. Az alább leírt kísérletet hagyományos mód-15 szerekkel összhangban hajtjuk végre [Referencia: J. Immunology, 106, 1002— 1011(1971)]. Patkányokat érzékenyítünk tojás albumin antigénnel, hogy antiszérumot nyerjünk.- Az S—D törzs patkányait (8 hetes hím állatok) passzívan érzékenyítjük 50 pl így nyert tojás albumin elleni szérum hátba adott intradermális injekciójával. 48 órával később minden patkánynál kihívást' idézünk elő tojás albumint (2,5 ng) és Evans kéket (2,5 mg) tartalmazó fiziológiás sóoldat intravénás injekciójával. 60 perccel az injekció után az Evans-kék kiszivárgásának tulajdonnítható kék festékfolt-kifejlődést az érzékenyített helyen megfigyeljük. 5 perccel a kihívás után a vizsgált vegyületet (150 pl) intradermálisan beinjektáljuk az érzékenyített helyen. DSCG-t (dinátrium-kromoglikát) alkalmazunk kontrollként. A vizsgálati eredményeket az alábbi 5. Táblázatban adjuk meg. 5. TÁBLÁZAT 16 A kék folt koncentrált kifejlődése* Szer f.imól/1 + +_Valószínűség Fiziológiás sóoldat Plipos-5 0 0 ** tatin Ai 590 0 0 5 P L 0,05 59 0 1 4 P Z 0,05 5,9 2 3 0 nem szignifikáns DSCG 590 0 1 4 P <4 0,05 59 0 1 4 P 0,05 * Az állatok száma, amelynek folttal rendelkeznek egy 5 állatból álló csoporton belül ** P = kockázati tényező Amint az 5. Táblázatból látható, 590 és 59 pmól/1 Plipostatin A, beadása szuppreszszív hatást okoz a PCA reakcióra, amely a DSCG hatásával mérhető össze. Ezek az adatok alátámasztják azt a tényt, hogy a vegyületek szuppresszív hatást mutatnak az I. típusú allergiás rendellensségekre, ilyenek az asztma, szénanátha és nem helyidermatitisz. A találmány előnyei Amint ez a fentebb bemutatott kísérletekből nyilvánvaló, a jelen találmány szerinti Plipostatinoknak szuppresszív hatása van a sejtek által közvetített immunitásra, és toxicitásuk viszonylag kicsiny, így ezek használhatók olyan immuno-szuppresszív szerként, amelynek eltérő a hatásmechanizmusa a hagyományos immuno-szuppresszív gyógyszerekétől. Ezen kívül a Plipostatinok szuppresszív hatást mutatnak a PCA reakciókra is, így ezek hasznosak allergiaellenes szerként is. 193838 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
