193835. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szerves vegyületek előállítására
génforrást 0,1—5%, előnyösen 0,5—2%, a sókat szokásos koncentrációban, előnyösen 0,001-0,5% koncentrációban alkalmazzuk, ahol a százalékos értékek tömeg/térfogat értékeket jelölnek. A habzásgátlót 0,5% koncentrációban alkalmazzuk. A tápközeg sterilizálását 100 140°C-on, előnyösen 120-130°C-on végezzük. A szaporodó tenyészet pH-ját előnyösen mintegy 6 és mintegy 8,5, különösen 6,5 és 8,0 közötti értéken kell tartani. A pH túl erős csökkenését a savas közegben megakadályozhatjuk egy szerves vagy szervetlen bázis, előnyösen kalcium-karbonát adagolásával. Amint az a fermentációs technikában szokásos, automatikus pH-szabályozás is végezhető úgy, hogy steril szerves vagy szervetlen savat, pl. kénsavat vagy steril lúgot, pl. nátrium-hidroxidot permetezünk időnként a tenyészoldathoz. Célszerű biztosítani azt, hogy a mikroorganizmusok oxigénnel, valamint a tápanyagokkal megfelelően érintkezésbe kerüljenek. Ez a szokásos módszerekkel, mint például rázással vagy keveréssel elérhető. A tenyésztési hőmérséklet mintegy 16°C és mintegy 42°C között, előnyösen 24°C és 32°C között, különösen előnyösen 28°C körül van. A tenyésztés ideje széles határok között változhat, ebben például szerepe van a tápközeg összetételének és a tenyésztési hőmérsékletnek. A mindenkori optimális körülményeket mikrobiológiai területen jártas szakember könnyen meghatározhatja. Ügy találtuk, hogy a tenyészközegben felszaporodó találmány szerinti vegyület maximális koncentrációját a tenyésztés kezdetétől számított mintegy 1 — 7, előnyösen 1—4 nap alatt eléri. Mint általában a mikrobiológiai eljárásoknál, a tápközeg befertőződését el kell kerülni. Ennek érdekében megtesszük a szokásos intézkedéseket, így a tápközeg, tenyésztő edények, valamint a levegőztetéshez szükséges levegő sterilizálása. A berendezések sterilizálása történhet gőzzel vagy száraz sterilizálással. Amennyiben a tenyésztés során nem kívánt mennyiségű hab képződik, a szokásos kémiai habzásgátlók adagolhatok, így például folyékony zsiradékok és olajok, olaj-víz-emulziók, paraffinok, hosszabb szénláncú alkoholok, pl. oktadekanol, szilikonolajok, polioxi-etilén-, illetve polioxi-propilén-származékok. A habzást a szokásos mechanikai berendezések segítségével (amelyek pl. a centrifugális erőt használják ki) is megszüntethetek. A találmány szerinti vegyületeket a tenyészközegből az általában szokásos fiz lka i-kémiai módszerekkel lehet elválasztani, így extrakcíóval, kicsapással és/vagy kromatográfiával. Az elválasztott vegyületeket az említett módszerekkel tovább lehet tisztítani. Sok esetben a tisztítás nem szükséges, mert az adott esetben jelenlevő szennyezés a vegyület hatékonyságát nem befolyásolja károsan. 4 5 Annak megállapítását, hogy a fent említett izolálási és tisztítási műveletekkel kapott frakciók melyikében vannak a találmány szerinti vegyületek a legnagyobb koncentrációban jelen, előnyösen az antibiotikus aktivitás meghatározásával végezzük. Tesztorganizmusként előnyösen Staphylococcus aureus 1756, Bac. subtílis ATCC 6633 és Escherichia coli 14 használható. A találmány szerinti vegyületek izolálása és tisztítása vizes tápközeg esetén úgy végezhető, hogy miután a vegyületeket a tenyésztőközeg maradékában feldúsítottuk, a tenyészközeg szürletét és a micéliumokat a szokásos módszerekkel (pl. centrifugálással) elválasztjuk. A találmány szerinti vegyületek a tenyészközeg szürletéből a szokásos extrakciós, kicsapásos és/vagy kromatográfiás eljárásokkal izolálhatok és adott esetben tisztíthatok. A kromatográfiát oszlopkromatográfia formájában végezhetjük. Adszorpciós szerként a szokásos szervetlen vagy szerves adszorpciós szerek alkalmazhatók, így alumínium-oxid, szilikagél, magnézium-szilíkát, aktívszén, cellulóz, cellulózszármazékok, műgyanták, mint pl. poliamidok, pl. acetilezett poliamidok vagy dextrángélek. Futtatószerként különböző oldószerek vagy oldószerelegyek alkalmazhatók, amelyekben a találmány szerinti vegyületek oldhatók. Előnyösen metanolt vagy kloroform és metanol elegyét (pl. 1:1 térfogatarányban) alkalmazzuk. A találmány szerinti vegyületek elválasztását előnyösen kromatográfiás eljárással végezzük, pl. nem- specifikus adszorpcióval hidrofób szorbenseken vagy géldiffuziós kromatográfiával, amelyek a vízben rosszul oldódó természetes anyagok tisztításának ismert módszerei. A találmány szerinti vegyületek kereskedelmi méretekben történő előállítását előnyösen hidrofób hordozógyantán történő adszorpcióval, majd azt követő deszorpcióval végezzük. Hidrofób hordozógyantaként használható például Lewapol, Bayer Ag. gyártmánya. A deszorpciót például rövidszénláncú alifás alkoholokkal végezhetjük, előnyös a metanol vagy az etanol alkalmazása. • Az így előtisztított frakciót a szokásos módszerekkel tovább tisztítjuk. Ezt előnyösen géldiffuziós eljárással végezzük. A Sephadex LH-20R felhasználásával végzett kromatográfia megfelelően végbemegy. Az így nyert termék tisztasága általában nagyobb, mint 50%. A találmány szerinti vegyületeket előnyösen a következőképpen izoláljuk és tisztítjuk: A micéliumokat a tenyészközegből előnyösen centrifugálással elválasztjuk, és vízzel elegyedő oldószerrel többször előnyösen kétszer extraháljuk. Oldószerként rövidszénláncú alkoholok, például etanol vagy izopropanol, valamint ketonok, ezek közül különösen aceton alkalmazható. A vizes szerves oldószeres oldatot vákuumban, pl. a tenyészközeg mint-6 193835 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
