193835. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szerves vegyületek előállítására
7 193835 8 egy huszadrészét kitevő térfogatra betöményítjük, és fagyasztva szárítjuk. Ezt a nyers terméket vízzel szuszpendáljuk, és a találmány szerinti vegyületeket vízzel nem elegyedő oldószerrel, például ecetsav-észterekkel vagy ketonokkal extraháljuk. Ebből az extraktumból a vegyületeket szokásos kromatográfiás módszerekkel, előnyösen Sephadex LH 20* -en vagy szilikagélen végzett kromatográfiával izolálhatjuk. A vegyületeket a tenyészközeg szürletéből is izolálható, aktívszénen, illetve alkalmas gyantán történő adszorpcióval. Különösen alkalmas módszernek bizonyult a találmány szerinti vegyületeknek polisztirol-bázisú nem-specifikus adszorbergyantán történő megkötése. Ilyen gyanta például az Amberlite XAD, Roehm und Haas gyártmánya vagy a Lewatit OC 1031, Bayer gyártmánya. A találmány szerinti vegyületek deszorbeálását frakcionáltan, víz és szerves oldószerek keverékével, előnyösen víz-metanol-eleggyel végezzük. A Staphylococcus aureus 1756-tal végzett teszt alapján aktívnak mutatkozó frakciókat csökkentett nyomáson a szerves oldószer teljes eltávolításáig betöményítjük, és a maradékot a tenyészközeg térfogata mintegy századrészének megfelelő térfogatra szuszpendáljuk és fagyasztva szárítjuk. A liofilizátumot vízzel szuszpendáljuk, és előnyösen ecetsav-etilészterrel vagy más, víz-1. táblázat zel nem elegyedő oldószerrel extraháljuk. Az extraktumból a találmány szerinti vegyületeket szokásos kromatográfiás módszerekkel, előnyösen Sephadex LH 20 -en és szilikagélen 5 végzett kromatográfiával nyerhetjük ki. Ahogyan már említettük, a találmány szerinti vegyületek antibakteriális hatással rendelkeznek. Ezt a következőképpen igazoljuk: Különböző tesztorganizmusokkal egy éj- 10 szakás tenyészeteket készítünk: ezekből 1 mlrel steril, előtemperált tápközegeket oltunk be. Ezután a tesztorganizmusokat megfelelő hőmérsékleten, rázógépen addig inkubáljuk, míg a sejtek a tog-szakaszt el nem érik. Ezeket az- 15 után steril, temperált tápközeggel 0,02-0,04 OD578 értékig (OD=optical density=látható extinkció) hígítjuk. Ezeket a szuszpenziókat adjuk a hatóanyaghoz, és hígitási sorokkal különböző hatóanyagkoncentrációkat állítunk 20 elő. Amikor a kontrollminták (hatóanyag nélkül) megfelelő inkubálás után erős zavarosságot mutatnak, kiértékeljük az MHK értékeket (MHK=minimális gátlókoncentráció), amelyek annak a hatóanyagkoncentrációnak 25 felelnek meg, ahol a minta zavarosságot nem mutat. A kísérleteket antibiotikum 3. tápközeggel végeztük. Az inkubálási időt a mérésig, a kiindulási OD értéket és az inkubálási hőmérsék- 30 letet a különböző tesztorganizmusok esetén a következő táblázatban foglaljuk össze: Tesztorganizmus MHK ( jug/ml) Inkubálási hőmérséklet (°C) Inkubálási idő a mérésig (óra) OD5 7 a Bacillus brevis 2,5 37 6 0,02 Bacillus cereus 0,6 37 5 0,04 Bacillus subtilis 0,6 37 4,5 0,02 ATCC 6633 E. coli 14 1,3 37 4 0,02 E. coli A 261 2,5 37 4 0,02 Proteus vulgaris 1,3 37 4 0,04 Pseudomonas 10 27 4 0,02 aeruginosa Pseudomonas aeru-10 37 4 0,03 ginosa Ellsworth Serratia mareescens ; 2,5 30 4,5 0,02 Staphylococcus aureus A 1756 1,3 37 4 0,02 Staphylococcus aureus P 209 0,6 37 4 0,02 A találmány szerinti vegyületek jó antibakteriális aktivitást mutatnak különböző Gram-pozítív és Gram-negatív baktériumokkal szemben. A találmány szerinti vegyületek tehát mi id humán, mind állatgyógyászatban gyógyszerként használhatók. Különösen jelentős a serßO tés-dizentériában és szarvasmarhák ketózisában való alkalmazhatósága. A találmány szerinti vegyületek tehát antibakteriális hatású gyógyszerkészítmények hatóanyagaként használható. Különösen előnyösek azok az antibakteriális hatású készít& mények, amelyek a találmány szerinti vegyü-5
