193619. lajstromszámú szabadalom • Eljárás allil-amin-származékok előállítására
193619 ban feloldjuk, végül éterrel kétszer extraháljuk. A metanolos szűrletet rotációs bepárlóban koncentráljuk, és a maradékot éter és 1 N nátrium-hidroxid közt megosztjuk. Az egyesített éteres fázisokat egyszer 100 ml, majd kétszer 50 ml 1 N sósavval extraháljuk. Az egyesített savas fázisokat jégfürdőn lehűtjük, szilárd kálium-hidroxid hozzáadásával megliígosítjuk, majd nátrium-kloriddal telítjük és háromszor extraháljuk éterrel. Az egyesített éteres fázisokat koncentráljuk,és a maradékot 70°C hőmérsékleten, 9,33 Pa nyomáson ledesztillálva 10,78 ml színtelen folyadékot kapunk. Termelés: 77%. A szabad bázis 6,95 g-ját (0,05 ml) 100 ml éterben feloldjuk és vízmentes sósav éteres oldatával kezeljük cseppenként, addig amíg már nem képződik több csapadék. Az elegyet jégfürdőn 15 percig keverjük, majd szűrjük, és az összegyűjtött sót etanol/2-propanol elegyből átknstályosítva 6,86 g sápadtszürke tűs kristályos anyagot kapunk. Olvadáspont: 140-145°C (bomlás). Elemanalízis a C7H9NS.HC1 képletre: számított: C 47,86; H 5,74; N 7,97. talált: C 47,81; H 5,75; N 8,08. Hasonló módon állítjuk elő a 2-(3-tienil)-allil-amin hidrokloridot, amelynek olvadáspontja: 181-182°C. Elemanalízis a C7H9NS.HC1 képletre: számított: C 47,86; H 5,74; N 7,97. talált: C 47,68; H 5,96; N 7,76. A találmány szerinti eljárással előállítót! (I) általános képletű allil-aminok dopamin ß-hidroxildz (DBH) inhibitorok és ezt egy mechanizmus bizonyítja, amelyben fontos szerepe van az inaktivációs időnek, koncentrációnak és az aszkarbát-függésnek. Az enzim közvet-3 lenül inaktiválódik, így az (I) általános képlefű vegyületek értékes terápiás szerek a hipertenzió kezelésében. A találmány szerinti eljárással előállított 5 vegyületek dopamin ß-hidroxiläz gátló tulajdonságai ismert, standard módszerekkel, így a 4 415 191 számú USA-beli szabadalmi leírásban ismertetett módszerekkel könnyen meghatározhatók. Például, annak meghatáro- 10 zását, hogy vajon a DBH inhibíció időfüggő kinetikájú-e, a következő módszerrel szemléltetjük: a DBH kiváltotta enzimatikus oxidációt vizes oldatban, molekuláris oxigén, valamilyen elektrondonor, mint amilyen az aszkor- 15 bát, és az enzim számára pH=5 értéknél szükséges kofaktorok jelenlétében, 20-40°C, előnyösen 37°C hőmérsékleten határozzuk meg. A vizsgálandó vegyületeket hozzáadjuk a kívánt koncentrációban,és a rendszert inkubál- 20 juk. Különböző időintervallumokban kiveszünk alikvot mennyiségeket és mérjük a DBH aktivitást, szubsztrátként tiramint használva. A reakciót az oxigénfelvétel mérésével követjük, polarográfiás elektród és egy oxigén moni- 25 tor alkalmazásával, S. May és társai (J. Bioi. Chem. 256, 2258 (1981)) módszere szerint. A DBH inaktivációjára vonatkozó inhibíciós konstansokat minden vegyület esetében ismert módszerekkel, így például Kitz és Wil- 30 son (J. Bioi. Chem. 237, 3245 (1962)) módszerével határozzuk meg. Az I. táblázatban látható vegyületeket a fenti módszerrel vizsgálva, a DBH inhibíciós aktivitása az inkubációs idő függvényében nő. Az aktivításcsök- 35 kenés kezdeti sebessége a növekvő inhibitorke ncentrációval nő. Az I. táblázat eredményei azt mutatják, hogy a 2-(2-tienil) -allil-amin a hatásosabb izomer, ezt illusztrálja a gyors inaktivációs sebesség (Knakt) és az alacsony 40 inhibíciós konstans (KO-4 I. táblázat DBH inhibíciós aktivitás — in vitro Vegyület Ki /mH/ Kinakt /Perc -1/ 2-(2-tienil)-allil-amin 2 0,02 2-(3-tienil)-allil-amin 2 0,004 A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivo vérnyomáscsökkentő képességét jól ismert módszerekkel, magas vérnyomású patkányok alkalmazásával határozhatjuk meg. A vizsgálandó vegyületet intraperitoneálisan (i.p.) vagy orálisan (p.o.) adjuk be a patkányoknak és folyamatosan figyeljük az állatok vérnyomását. Mivel a DBH a fő enzim a pirokatechin-aminok szintézisé- 55 ben, az várható, hogy egy inhibitor jelenléte csökkenti a keletkezett pirokatechin-aminok mennyiségét,és így nyilvánul meg a magas vérnyomásellenes hatás. Az erre vonatkozó eredmények a II. táblázatban találhatók. 3
