193585. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok és makroorganizmusok sejtkultúráinak tenyésztésére alkalmas szilárd táptalajok előállítására
9 1. 193585 Táblázat 10 Mikroorganizmus törzs fajtája Oltási mennyiség (kolóniaképző egységben) A képződött kolóniák átlagszáma (1. példa szerinti tápolaj) Képződött kolóniák átlagszáma 977466 sz. szer. tanúsítvány szerinti tápolaj Staph, aureus 209 100 98 94 E. Coli K-12 100 96 92 E. Coli V-17 100 94 84 Sh. flexneri 100 82 70 Bac. cereus 504 100 86 78 Bac. subtilis 100 88 74 Candida albicans 100 78 70 Mint ez a táblázat adataiból kitűnik, a találmány szerinti eljárással előállított, szilárd táptalajon a mikroorganizmusok növekedési ^5 intenzitása nagyobb, mint a kontroliként alkalmazott 977466 számú szovjet szerzői tanúsítvány szerinti táptalajon. 2. példa 30 Az A és C oldatokat az I. példában leírtak szerint állítjuk elő. A B oldat előállításához 0,844 g N,N’-metilén-bisz-akrilamidot 500 ml 0,85%-os vizes nátrium-klorid oldatban oldunk, 60°C-ra melegítjük,és feloldjuk benne 35 470 g akrilamidot, majd szűrjük és 0,85%-os nátrium-klorid oldattal 1000 ml-re egészítjük ki. A reakciókeveréket az 1. példában leírtak szerint készítjük. 40 A fenti reakciókeverék ily módon az akrilamid és N,N’-metilén-bisz-akrilamid monomereket 15,0 : 0,027 tömegarányban tartalmazza, és a monomerkeyerék fiziológiás oldathoz viszonyított tömegarány 1 : 7. A kopo- 45 limerizáció az 1. példában leírtak szerint megy végbe. A kapott poliakrilamid-gél tárcsákat Hanks-féle fiziológiás oldatban tömegük 3,2- szeresére duzzasztjuk, amikor is a poliakrilamid-gél a következő összetételű: 50 Akrilamid-N,N’-metilén-bisz-akrilamid kopolimer 4,0 tömeg% Fiziológiás oldat 96,0 tömeg% A fenti gélből készült tárcsákat ezután -hús-pepton húsleves tápoldattal itatjuk át, az 55 1. példában leírtak szerint. Vizsgálandó mikroorganizmusként Staphylococcus aureus 209 P törzset alkalmazunk. Kontrollként a fentemlített mikroorganizmus 977466 számú szovjet szerzői tanúsítvány szerint előállított 60 szilárd táptalajon és hús-pepton-agar táptalajon tenyésztett kultúráit alkalmaztuk. Az inokuláció, majd a termosztátban 37°C hőmérsékleten 24 órán át végzett inkubálás után a találmány szerinti eljárással előállított táp- g_ talajon sokkal intenzívebb Staphylococcus- 6-kultúra növekedést figyelhetünk meg, mint a kontroll táptalajon. A Staphylococcus kolóniák megjelenése jellegzetes, kerek, sima, fényes, olajos, intenzív pigmentálódással. A megfigyeléseket mikroszkopikus úton végeztük. A kolóniák bakteriológiai kaccsal való levételekor a táptalaj felülete nem károsodik. 3. példa Az A és C oldatokat az 1. példában leírtak szerint állítjuk elő. A B oldat előállításához 1000 ml-es mérőlombikba bemérünk 0,937 g N, N’-metilén-bisz-akrilamidot és 400 ml O, 85%-os fiziológiás oldatban feloldjuk, majd 60°C-ra melegítjük és hozzáadunk 625 g akrilamidot és teljes oldódása után a térfogatot 1000 ml-re egészítjük ki. A reakciókeverék az akrilamid és N,N'-metilén-bisz-akrilamid monomereket 20,0 : : 0,03 tömegarányban tartalmazza és a keverék fiziológiás oldathoz viszonyított tömegaránya 1 : 4. A kopolimerizációs reakció az 1. példában leírtak szerint megy végbe. A kapott poliakrilamid-gél tárcsákat fiziológiás Earl-oldatban tömegüknek 3,7-szeresére duzzasztjuk. Ekkor a poliakrilamid-gél a következő összetételű: Akrilamid-N,N’-metilén-bisz-akrilamid kopolimer 5,3 tömeg% Fiziológiás oldat 94,7 tömeg%. A poliakrilamid-gél tárcsák átitatására sókeverékes, folyékony tápközeget alkalmazunk, és a műveletet, valamint a sterilizálást is az 1. példában leírtak szerint végezzük. Sterilizálás után a szilárd táptalaj tulajdonságai nem változnak. Vizsgálandó mikroorganizmusként e kísérletünkben Fusarium avenaceum gombakultúrát alkalmazunk. A tenyésztés 4. napján jellegzetes rózsaszínű kolóniák jelennek meg sűrű gombatelepekkel. Mikroszkopikus vizsgálat során e telepek karakterisztikus szerkezete és spóraképződés figyelhető meg. A kolóniák bakteriológiai kacs
