193585. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok és makroorganizmusok sejtkultúráinak tenyésztésére alkalmas szilárd táptalajok előállítására
193585 csal jól levehetők és a táptalaj felülete nem károsodik, 4. példa Az A és C oldatokat az 1. példa szerint ál- 5 Htjuk elő. A B oldat előállításához 4,125 g N,N’-metilén-bisz-akrilamidot 500 ml 0,85%os vizes nátrium-klorid oldatban oldunk, 60°C-ra felmelegítjük, hozzáadunk 470 g akrilamidot és a teljes oldódásig keverjük. Ek- '0 kor leszűrjük és a térfogatot 0,85%-os vizes nátrium-klorid oldattal 1000 ml-re egészítjük ki. A fenti oldatokból a reakciókeverék elkészítését és a kopolimerizációt az 1. példában 15 leírtak szerint végezzük. A reakciókeverék ily módon az akrilamid és N,N’-meti!én-bisz-akrilamid monomereket 15,0 : 0,132 tömegarányban tartalmazza, és a keverék fiziológiás sóoldathoz viszonyított 20 tömegaránya l : 5. 11 A fenti poliakrilamid gélt Staphylococcus 209 P biomassza előállításához szükséges, szilárd táptalaj alapjaként alkalmazzuk. Az előállított poliakrilamid tárcsákat 0,85%-os nátrium-klorid oldatban mossuk és Hottinger-féle 200 mg% aminonitrogént tartalmazó tripszin-emésztési húsleves tápöldattal tömegük 2,5-szörösére duzzasztjuk. A kész, szilárd táptalajt gőzben, nyomás alatt, 120°C hőmérsékleten 30 percig sterilizáljuk. Kontroll táptalajként agarizált Hottinger-táptalajt (200 mg% aminonitrogén tartalommal) és a 977466 számú szovjet szerzői tanúsítványban leírt eljárással előállított szilárd táptalajt alkalmazzuk. 1-1 60—63 mm átmérőjű tárcsára számítva 10-8 mikroba/1 ml Staphylococcus-t inokulálunk. A következő 2. táblázatban összefoglaljuk a kapott eredményeket, azaz megadjuk a különböző táptalajokon kapott Staphylococcus biomassza mennyiségeket. 12 2. Táblázat Staphylococcus biomassza mennyisége mg/cm "ben E példa szerint előállított táptalajon 1. példa szerint előállított táptalajon 977466 számú szovjet szerzői tanúsítvány szerinti táptalaj on Agarizált táptalaj on 2,01 1,57 1 ,50 1,55 A példa szerinti poliakrilamid-gél duzzasztás utáni összetétele a következő: Akrilamid-N,N -metilén-bisz-akri1-amid kopolimer 6,0 tömeg% Hottinger-féle tripszin-emésztési-húsleves oldat 94,0 tömeg% 5. példa A poliakrilamid gélt az 1. példában leírtak szerint állítjuk elő és Verticilium dahliae gom- 50 ba tenyésztéséhez szükséges, szilárd táptalaj alapjaként alkalmazzuk. A poliakrilamid-gél tárcsákat 0,85%-os nátrium-klorid oldattal átmossuk, majd sókeverékes folyékony tápoldatban tömegük 3,5-szörösére duzzasztjuk. 55 Sterilizálás után a kész táptalajt a gombakultúrával beoltjuk. Kontrollként agarizált, sókeverékes tápoldattal átitatott, 1. példa szerint előállított táptalajt alkalmazunk, qq Az inkubálást 28°C hőmérsékleten végezzük. A példa szerint előállított, szilárd táptalajon a gombák a tenyésztés harmadik napján igen intenzív szaporodást mutattak karakterisztikus morfológiai és kultúratulajdonságok mellett, míg hasonló szaporodás a kont- 65 roll-táptalajokon csak a tenyésztés ötödik napján volt megfigyelhető. 6 példa Az 1. példa szerint elkészített reakcióke veréket egy reaktorba öntjük és a képződő poliakrilamid-gélből két lapos csíkot alakítunk ki. Ezek egyike 180 x 100 x 0,8 mm méretű, a másik 180 x 100 x 2,5 mm méretű, és ez utóbbin 3 x 1,0 mm-es üregeket képezünk ki sakktábla-szerű elrendezésben, egymástól 1 — —1,5 mm távolságra. A sterilizációt 40 percig végezzük, majd a két csíkot az 1. példában leírt összetételnek megfelelő reakciókeverékkel átitatjuk, és oly módon helyezzük egymásra, hogy zárt üregek alakuljanak ki a makro- és mikroorganizmusok tenyésztése számára. Ezt követően 40 perc után egy egységes blokk alakul ki, amelyet úgy választunk részekre, 7
