193512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hibrid emberi leukocita interferonok előállítására
193512 27 28 A 4. táblázatban különböző LelF hibridek- sát, továbbá a kétféle sejten meghatározott aknek WISH,illetve MDBK sejteken mórt aktívitá- tívltások hányadosát tüntetjük fel. 4. táblázat LelF hibrid (Pvu II) Egység/liter WISH sejt tenyészet Egység/llter MDBK sejt tenyészet Aktivitások hányadosa WISH/MDBK AB 2,4 x108" 4x10' 6 AD 1,2x108 2x107 6 AF 6x107 1x107 6 AG 4x107 1,5x107 2,7 Al 3,2x107 1,2x107 2,7 BA 1,5x107 1x107 1,5 BD 6x107 1,5x107 4 BF 1x106 3,5x105 0,3 BG 2x107 6x107 0,3 DA 3x1.06 1,2x108 0,025 DB 2x106 5x107 0,04 DF 2x10Ö 4x106 0,05 DG 2x105 1,5x107 0,014 FA 2x105 6x10' 0,003 FB 2x10fe 8x107 0,025 FD 1x107 2x107 0,5 FG 1x106 4x107 0,025 IA 2,4x106 6x107 0,04 Ax 8x107 1,2x 108 0,7 B* 8x107 4x108 0,2 C* 2x107 1,5x107 1,3 Dx 5x106 2,5x107 0,2 F* 2x107 2x108 0,1 lx 1,6x107 1,2x107 1,3 x Összehasonlítási célokra Parenterális beadás A találmány szerinti hibrid leukocita interferonok beadhatók parenterálisan olyan személyeknek, akiknél daganatellenes vagy vírusellenes kezelésre van szükség, valamint olyan esetekben, amikor immunszuppresszív viszo- 40 nyok állnak fenn. Az alkalmazott dózis ugyanolyan lehet, mint a jelenleg klinikai vizsgálat alatt álló, emberi eredetű anyagoké, például körülbelül napi ( 1 -10)x 1 06 egység. Olyan anyagok esetében, amelye^ koncentrációja 1% feletti, való- 45 színűleg 5x10 egységig terjedhet a napi dózis A fentebb ismertetett, majmokkal végzett vizsgálatok kezdeti eredményei arra mutatnak, hogy a bakteriális úton előállított leukocita interferonból lényegesen nagyobb dózisok alkal- 50 mázhatok a nagyobb hatás elérése érdekében, annak következtében, hogy nincsenek jelen a leukocita interferontól eltérő, emberi eredetű fehérjék. Ezek a fehérjék ugyanis pirogén anyagokként hathatnak, s kedvezőtlen hatásuk le- 55 hét, például rossz közérzetet, testhőmérsékletemelkedést stb. okozhatnak. Például a következőképpen állíthatunk elő egy parenterálisan beadható, gyakorlatilag homogén, bakteriális úton termelt LelF készít- 60 mónyt: 3 mg leukocita interferont, amelynek a fajlagos aktivitása mondjuk 2x108 egység/mg, 25 ml 5 N emberi szérum albuminban oldunk, az oldatot bakteriológiai szűrőn vezetjük át. és 65 a szűrletet aszeptikus körülmények között 100 ampullába töltjük. Minden egyes ampulla 6x106 egység tiszta interferont tartalmaz, amely parenterálisan beadható. Az ampullákat célszerűen hidegen (-20“C) tároljuk, felhasználásig A találmány szerinti vegyületeket önmagában ismert módón gyógyszerkészítményekké alakíthatjuk. Ekkor a polipeptidet gyógyászatitag elfogadható vivőanyaggal/anyagokkal keverjük össze. Az alkalmas vivőanyagokat és gyógyszerformákat például a Remington's Pharmaceutical Sciences (szerkesztő E W Martin) ismerteti. A gyógyszerkészítmények a találmány szerinti interferon fehérje hatékony mennyiségét tartalmazzák, megfelelő mennyiségű vivőanyaggal együtt. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás egy 165-166 aminosavból — vagy ha az első amlnosav N-terminálisához metionin kapcsolódik, 166-167 aminosavból — álló, aminosav-szekvenciájában két különálló, egymást sorban követő, az aminosavak fajtája és száma tekintetében különböző természetes eíőfor dulású leukocita interferonoknak megfelelő al szekvenciát tartalmazó, vírusellenes hatású polipeptid előállítására, amely polipeptid amino sav-szekvenciája a teljes összetétel tekinteté ben eltér a természetben előforduló leukocita interferonokétól, azzal jellemezve, hogy repli kációra képes plazmid-jellegű kifejeződő hor 15
