193291. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív heptapeptidek és sóik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkkészítmények előállítására

9

193291

10

[a]“ = -98,9 ° Rf s = 0,13; Rf.

(c=l, metanol); = 0,58.

12. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH (XII) előállítása

5,00 g (5,48 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) 2(Tml metanolban oldunk és 10 ml 1 mól/1 koncentrációjú nátrium-hidroxiddal szobahőmérsékleten 2 órán át kezelve elszappanosítjuk. Az oldatot vízzel hígítjuk, vákuumban részlegesen koncentráljuk, 0°C-ra hűtjük, 5 mól/l-es sósavoldattal pH 2-re savanyítjuk, majd etil-acetáttal néhányszor extraháljuk. A szerves fázist telített vizes nátrium-klorid-oldatta! semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószer eltávolítása után 3,99 g (XII) vegyületet kapunk, a hozam 81 %, olvadáspontja 194-200 °C (bomlás közben). [a]p° = -102,9 ° (c=l, metanol);

Rfc = 0,34;

E5)8 = 0,18 Glu.

13. lépés: H-.Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp -Met-OH.HC1 (XIII) előállítása

3,85 g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-M.et-OH-ból (XII) kiindulva, a 6. lépés szerinti eljárással 3,05 g nyersterméket kapunk izopropanol—diizopropil-éter elegyből. A nyersterméket DEAE-Sephadex A-25 (márkanév) töltetű oszlopon kromatograíálva tisztítjuk, az eluálásra 0,02 mól/l-es ammónium-acetát-oldatot (pH 6,7) használunk. A terméket az ecetsavból liofilizáljuk, majd ecetsavban újraoldjuk és 6 ml ecetsavas telített hidrogén-klorid-oldattal kezeljük. Az oldatot dietil-éterbe öntjük. 2,57 g (XIII) kívánt vegyületet kapunk 72 % hozammal, olvadáspontja 150 °C.

[a]o = -90,5 0 (c=l, metanol);

Rf» = 0,30;

H1j2 = 0,58 Glu.

’ 2. példa »

H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe.HCI (XIV) előállítása

5,00 g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu -Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) — melyet az l. pél da 11. lépésében állítottunk elő — az I. példa 6. lépése szerint kezelünk, azzal az eltére'ssel, hogy a kromatográfiás tisztítási műveletben eluensként díklór-metán—metanol—víz 86:14:1 térfogatarányú elegyet használunk. 2,73 g cím szerinti (XIV) vegyületet kapunk etil-acetátból végzett átkristályosítás után, olvadáspontja 154 °C.

[cc]22 = -92,4 ° (c= 1, metanol);

Rf D = 0,34;

E(jg = 0,58 Glu.

3. péTda

H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-.N H2.HCI

(XVI) előállítása

1. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met--NH2 (XV) előállítása

E,00g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) — melyet az 1. pél- 5 da 1. lépésében állítottunk elő — 100 ml metanol és 2 ml etiléngli'kol elegyében oldunk, és 0°C-on ammóniával telítjük. A reakciíelegyet 3 napon át hűtőszekrényben 1Q tartjuk, majd az ammónia feleslegét és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A nyersterméket 0,040-0,063 mm szemcseméretü eljárással részlegesen tisztítjuk, az eluálást etil -acetát és metanol 87:13 térfogatarányú

15 elegyével végezzük, a kapott terméket a következő lépésben további tisztítás nélkül használjuk fel. Jzopropanol—diizopropil-éter elegy, bői 5,58 g (XV) vegyületet kapunk, Rfc=0,31.

9n 2. lépés: H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met--NHj.HCI (XVI) előállítása

2,45 g (2,73 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu- Gly Trp-Met-NH2-ből (XV) kiindulva az 1. példa 6. lépésében leírtak szerint eljár- 25 va állítjuk elő a cím szerinti vegyületet, azzal az eltéréssel, hogy a kromatográfiás tisztítási műveletben eluensként diklór-metán, metano' és víz 85:15:1, illetve 80:20:1 térfogatarányú elegyeit használjuk. 1,55 g cím szerinti (XVI) vegyületet kapunk, 68 % hozam- 30 mai metanol—izopropanol—diizopropil-éter elegyből végzett átkristályosítással, Sephadex G-lÓ-zel (márkanév) végzett sótalanítás után, olvadáspontja 150-158 °C. lalü = -74,8 ° (c= 1, metanol);

Rf, = 0,36;

E, 2 = 0,55 Glu.

4. példa

Növekedési vizsgálat sertéseken

40 A növekedési vizsgálatot 4 hetes időszakban /égeztük, csoportonként 7 db kasztrált hím sertésen (hibrid), melyeket alcsoportokra osztva válaszfalakkal felosztott ketrecekben tartottunk.

45 A sertések a kísérlet időtartama alatt 1 kg/nap adag eledelt kaptak (Höveler, normál típus, adalékok nélkül). A vizet az állatok cd libitum kapták. A súlyokat hetente mérti k.

50

A kísérlet eredményeit a következő táblázatban adjuk meg.

Anint a táblázat eredményeiből látható, a fiziclógiás sóoldattal kezelt állatok súlygya- 55 rapodása kisebb, mint a kezeletlen kontroll csopo té. Az injekció által kiváltott stressz miatti súlygyarapodás-csökkenés ellenére a TK-7 vegyülettel naponta kezelt állatok határozott mértékű súlygyarapodás-növekedést 60 mutattak. A táplálékhasznosítás tükrözi a súlygyarapodás eredményeit.

6