193291. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív heptapeptidek és sóik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkkészítmények előállítására
5 193291 6 mázzá. A fenti takarmányok összetétele az állattenyésztéssel foglalkozó szakemberek számára jól ismert. Az (I) általános képletű vegyületeket szubkután beültetett anyagként — például tabletta formában beültetve-?, vagy szubkután injekció formájában is adagolhatjuk az állatoknak, a hatóanyagból 1 —100 ng/kg, előnyösen 10—50 ng/kg napi dózisú felszabadulást biztosítva. Az alkalmazás módja nem korlátozza a találmány oltalmi körét-. A találmány szerinti eljárással előállított peptidek közül előnyösek az alább felsorolt vegyületek: H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH; H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-O-Me; H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-NH2. A találmány szerinti eljárást közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül — az alábbi példák segítségével kívánjuk megvilágítani. Az R/ értékeket szilikagél 60 F254 (Merck) réteggel bevont, 0,25 mm rétegvastagságú, 20 cm magas lemezeken határoztuk meg, a következő futtatóelegyeket használva: A-rendszer: benzol, 60-80 °C forráspontű benzin és etil-acetát 70:10:40 térfogatarányű elegye B-rendszer: benzol, etil-acetát, ecetsav és víz 100:100:20:10 térfogatarányú elegye (felső fázis) C-rendszer: benzol, etil-acetát, ecetsav és víz 100:100:40:15 térfogatarányú elegye (felső fázis) D-rendszer: n-butanot, ecetsav és víz 4:1:1 térfogatarányú elegye. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokat 18 és 25 °C között hőmérséklettartományban végeztük, ezért az Rj-értékekben ±5 % eltérés lehetséges. Az olvadáspontokat nyitott kapillárisban, Tottoli-készülékben mértük, és nem korrigáltuk. Az (I) általános képletü vegyületek többsége meglágyul és bomlik az olvadás bekövetkezte előtt. A kristályosításra, kicsapásra vagy eldörzsölésre használt oldószereket a példákban adjuk meg. A nagyfeszültségű papír-elektroforézist Pherograph-Original-Frakfurt Type 64 készülékkel végeztük, Schleicher-Schüll n. 2317 papi non, pH 1,2 értéken hangyasav, ecetsav és víz 123:100:777 térfogatarányú elegyében, 1600 V-on, 40 V/cm mellett; és pH 5,8 értéken piridin, ecetsav és víz 450:50: 4500 térfogatarányú elegyében, 1400 V-on, 32,5 V/cm mellett. A termékeket Glu-hoz viszonyított mozgékonyságukkal jellemeztük, pH 1,2 (E, 2) és pH 5,8 (E5;8) értéken. A példákban az alábbi rövidítéseket használtuk: BOC: tere-butoxi-ka rbonil-csoport Bzl : benzil-csoport Me : metil-csoport 1. példa H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH.HCl (XIII) előállítása 1. lépés: BOC-Trp-Met-OMe (I) előállítása 30,43 g (100 mmól) BOC-Trp-OH 200 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához -12 °C-on 11,2 ml (100 mmól) N-metil-morfolint, majd 9,9 ml etil-klór-for.miátot adunk. Az elegyet a fenti hőmérsékleten 2 percen át keverjük, majd hozzáadjuk 19,96 g (100 mmól) HCl.H-Met-OMe [Decker C.A.. és munkatársai: J. Biol. Chem. 180, 155 (1949)] és 11,2 ml (100 mmól) N-metil-morfolin 150 ml dimetil-förmamiddal készült hideg oldatát. A reakcióelegyet -12 °C-on 45 percen át, majd 0-15 °C-on 90 percen át keverjük, a sókt'd szűréssel elválasztjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, és egymás után néhányszor nátrium-kloridda! telített 1 mól/l-es citromsavoldajdal, 1 mól/l-es nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, illetve vízzel mossuk. A szerves fázist elvá'asztjuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. 39,12 g (I) vegyületet kapunk, a hozam 87 %. Olvadáspontja izopropanol, diizopropil-éler és petroléter elegyéből végzett átkrist ílyosítás után 95-97 °C; [a]J‘ = -25,1 (c=l, metanol); Rf» = 0,73; Rf*= 0,76. 2. lépés. H-Trp-IWet-OMe.HCI (II) előállítása 39,00 g (86,75 mmól) BOC-Trp-Met-OMe-t (I) 090 ml hangyasavban oldunk szobahőmérsékleten. A BOC-védőcsoport teljes mértékű e távolítása után — melyet vékonyréteg-kromatográfiás eljárással ellenőrzünk—az oldószert vákuumban 30 °C-on ledesztilláljuk. A maradékot metanolban oldjuk, 0 °C-ra hűtjük es hozzáadunk 34,7 ml (104,1 mmól) 3 mól/1 koncentrációjú tetrahidrofurános hidrogén-klorid-oldatot. Az oldószereket vákuumban < Itávolítva 33,48 g (II) vegyületet kapunk, 100 % hozammal, olaj formájában. Rfp = 0,71; E, J = 0,82. 3. lépés: BOC-Gly-Trp-Met-OMe (III) előállítása 15,20 g (86,75 mmól) BOC-Gly-OH-ból és 33 48 g (86,75 mmól) HCl.H-Trp-Met-OMe-ből (II) kiindulva az 1. lépés szerinti eljárással állítjuk elő a (III) vegyületet, azzal a;: eltéréssel, hogy a termék izolálását kloroform helyett etil-acetáttal végezzük. 26,37 g (III) vegyületet kapunk, 60 % hozammal. Olvadáspontja etil-acetát—dietik -éter diizopropil-éter elegyből átkristályosítva 149-145 °C; [a]p = -30° (c=l, metanol); Rf*= 0,27; Rf„ = 0,56; Rfe = 0,77. 4. lépés. H-Gly-Trp-Met-OMe.HCI (IV) előállítása 26 20 g (51,71 mmól) BOC-Gly-Trp-Met-OMe bői (III) kiindulva a 2. lépés szerinti eljárással 21,76 g cím szerinti (IV) vegyületet kapunk 95 % hozammal. Olvadáspontja 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
