193269. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-oxo-delta-4,9 és 3-oxo-delta-9,11-epoxi-19-norszteroidok előállítására
39 193269 40 •aminnal). Így 6,3 g cím szerinti vegyületet kapunk, amelyet etil-éterből átkristályosítunk, op. 216°C. B lépés . 11 ß- (3-Hidroxi-fenil)-17ß-hidroxi-17a-(prop-l-inil)-ösztra-4,9-dién-3-ori előállítása 5,42 g, fentiek szerint kapott terméket 20°C hőmérsékleten inertgázlégkörben bekeverünk 100 cm3 95°-os etanolba, majd hozzáadunk 5.5 g Redex CF gyantát és a reakcióelegyet 1.5 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A kapott reakcióelegyet szűrjük, az oldószert lepároljuk és a visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografáljuk (eluálószer ciklohexán/etil-acetát 1:1 arányú elegye). így 3,8 g, cím szerinti vegyületet kapunk, amelyet etil-acetátból, majd acetonból átkristályosítunk, op. 215°C, [at=+34,50±l0 (c=l% CHC13) Elemanalízis a C27H30O3 összegképlet alapján: számított: C%: 80,56 H%: 7,51 kapott: 80,5 7,5 A találmány szerinti vegyületek farmakolőgiai hatásának vizsgálata A találmány szerinti vegyületek hatása hormonreceptorokra: a) Patkányvese minerál-kortikoid-receptorára 140-160 g súlyú hím Sprague-Dawley EOPS patkányokat, amelyeknek a mellékveséjét 4-8 nappal előbb eltávolítottuk, megölünk és veséjükön in situ 50 ml puffert (10 mmól Trisz, 0,25 m szacharóz, HC1 7,4 pH-értékig) áramoltatunk át. Ezután eltávolítjuk a patkányok veséjét, dekapszuláljuk és 0°C hőmérsékleten Potter teflon edényben homogenizáljuk (1 g szövet 3 ml pufferban). A homogenizált anyagot 0°C hőmérsékleten 10 percig 800 g erővel centrifugáljuk. A felülüszóhoz 1(TÖ végső koncentrációban 1 lß,17ß-dihidroxi-21-metil-pregna-l,4,6- -trién-20-in-3-on-szteroidot adunk, hogy a tritiált aldoszteronnak a glükokortikoid receptorhoz való kötődését kiküszöböljük, mivel csak ez a vegyület kötődik a glükokortikoid-receptorhoz. A felülúszót 105 000 g erővel ultracentrifugáljuk 0°C hőmérsékleten. A kapott felülúszó azonos mennyiségeit 0°C hőmérsékleten állandó (T) tritiált aldoszteron-koncentráció mellett növekvő koncentrációjú (0-2500. KT9 mól) hideg aldoszteron vagy hideg találmány szerinti vegyület jelenlétében inkubáljuk. A (t) inkubációs idő elteltével a kötött tritiált aldoszteron koncentrációját (B) dextrán/szén adszorpcióval határozzuk meg. b) Patkányprosztata androgén-receptorára 160-200 g súlyú Sprague-Dawley htm patkányokat kasztrálunk. A kasztrálás után 24 órával az állatokat megöljük, a prosztatájukat eltávolítjuk, lemérjük és 0°C hőmérsékleten TS pufferben (10 mmól Trisz, 0,25 m szacharóz, HCl 7,4 pH-értékig) Potter teflon edényben homogenizáljuk (1 g szövet 5 ml putferre számítva). A homogenizált anyagot 0°C hőmérsékleten ultracentrifugáljuk (105 000 g 60 percig). A kapott felülúszó azonos mennyiségeit 0°C hőmérsékleten állandó (T) tritiált tesztoszteron-koncentráció mellett növekvő koncentrációjú (0-1000.10“9 mól) hideg tesz-, toszteron vagy találmány szerinti vegyület jelenlétében inkubáljuk (E) ideig. A kötött tritiált tesztoszteron koncentrációját (B) dextrán/szén adszorpcióval határozzuk meg. c) nyulak méhének progesztogérr-receptorára: Mintegy 1 kg súlyú fejletlen nyulaknak kután 25pgösztradiolt adunk. A kezelést követő 5. napon a nyulakat megöljük, a méhüket extraháljuk, lemérjük és 0°C hőmérsékleten TS pufferban (10 mmól Trisz, 0,25 m szacharóz, HCl 7,4 pH-értékig) Potter teflon edényben inkubáljuk (1 g szövet 50 ml pufferra számítva). A homogenizált anyagot ultracentrifugáljuk (105 000 g 90 percig) 0°C hőmérsékleten. A felülúszó azonos mennyiségeit 0°C hőmérsékleten állandó tritiált 17,21-dimetil-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion koncentráció mellett növekvő koncentrációjú (0-2500.10*9 mól) hideg 17,21-dimetil-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion vagy hideg találmány szerinti vegyület jelenlétében inkubáljuk (t) ideig. A kötött tritiált 17,21 -dimetil-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion koncentrációját (B) dextrán/szén adszorpcióval határozzuk meg. d) patkánycsecsemőmirigy glükokortikoid-receptorára: 160-200 g súlyú hím Sprague-Dawley patkányoknak eltávolítjuk a mellékveséjét. 4-8 nappal az eltávolítás után az állatokat megöljük, csecsemőmirigyüket eltávolítjuk és 0°C hőmérsékleten pufferban (10 mmól Trisz, 0,25 m szacharóz, 2 mmól ditiotreitol, HCl 7.4 pH-értékig) Potter tetrafluor-etilén edényben homogenizáljuk (1 g szövet 10 ml pufferra számítva). A homogenizált anyagot 0°C hőmérsékleten ultracentrifugáljuk (105 000 g 90 percig). A kapott felülúszó azonos mennyiségeit 0°C hőmérsékleten állandó (T) tritiált dexamethason-koncentráció mellett növekvő koncentrációjú (0-2500.10"9 mól) hideg dexa-methason vagy hideg találmány szerinti vegyület jelenlétében inkubáljuk (t) ideig. A kötött tritiált dexamethason koncentrációját (B) dextrán/szén adszorpcióval határozzuk meg. e) egér méhének ösztrogén-receptorára: 18-21 napos fejletlen nőstény egerek méhét eltávolítjuk, majd 0°C hőmérsékleten TS pufferban ( 10- mmól Trisz, 0,25 m szacharóz, HCl 7.4 pH-értékig) homogenizáljuk (1 g szövet 25 ml pufferra számítva). A kapott felülúszó azonos mennyiségeit 0, illetve 25°C hőmérsékleten állandó (T) tritiált ösztradiol-koncentráció mellett hideg ösztradiol vagy találmány szerinti vegyület jelenlétében (t) ideig inkubáljuk. A kötött tritiált ösztradiol koncentrációját (P) dextrán/szén adszorpcióval határozzuk meg. A kötés relatív affinitásának meghatározása: A kötés relatív affinitását (RAB) minden receptor esetén azonosan határozzuk meg. 21 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
