193217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunmodulátor gyógyszerkészítmények hatóanyagának előállítására
193217 Az Escherichia nemzetségbe tartozó baktérium jellemzői azonosak az 1. példában leírtakkal. A tág, mely a Klebsiella homológja, a C, morfológiai csoportba tartozik /az I.A.M.S. 5 International Committee for Taxonomy of Virus, Taxonomie des Bactériophages” albizottságának nomenklatúrája/, ikozaéderes feje,rövid, nehezen látható farka van, a gallér és a véglemez nem mutatható ki. Géles közegben 10 a hzis-plakkok mérete 0,5—3 mm, igen szabálytalan alakúak, körvonalaik elmosódottak és középpontjuk világos. Az r+ kiónok ritkák. 5 A coli fág jellemzőit az 1 . példában leírtuk Literenként a tápközeg összetétele: marhahúskivonat 3 g pepton 5 g NaCI 7 g Kétszer desztillált víz 1 literig. A tápközeget beoltjuk a stacioner növekedési fázisban levő Klebsiella penumoniae inokulumával. A kezdeti sűrűség 107 baktérium per ml. A tenyészetet 37°C-ra helyezzük és mérsékelt rázást alkalmazunk. 25 A látencia fázis végén, azaz körülbelül 60 perccel a beoltás után a baktériumokat megfertőzzük homológ tágjaikkal; a fertőzés gyakorisága 0,03. , 30 A Itzis kialakulását sejtszámláló segítségével követjük. Amikor ml-enként 10 baktériumnál kevesebb marad, a tápközeget ismét beoltjuk stacioner növekedési fázisban levő Escherichia inokulumával. Ezen újabb tenyészet kéz- 35 deti sűrűsége 5.107 Escherichia per ml. A látencia fázis végén, azaz az alkalmazott kísérleti körülmények között a második beoltás után 20 perc múlva a baktériumokat megfertőzzük a coli tagokkal. A fertőzés gyakorisága 40 0,1. A lízis előrehaladását sejtszámláló segítségével követjük. Amikor ml-enként lö3 Escherichiánál kevesebb marad, a tenyésztést leállít- 45 juk 0,22pm pórusméretű sterilező membránszűrön való átbocsátással. A két baktériumból származó lizátum-szűrlet tartalmazza az immúnmoduláló preparátumot. 4. példa Staphylococcus nemzetségbe tartozó baktériumból származó preparátum A Staphylococcus nemzetségű, aureus faj tájú, 1 savótípusú baktériumot a párizsi Pas- 555 teurintézet lajstromozta 65.6 hivatkozási szám alatt. A Staphylococcus homológ tágja az A, morfológiai csoportba tartozik /az O.A.M.S. Inter- 60 national Committee for Taxonomy of Virus, Taxonomie des Bactériophages” albizottságának nomenklatúrája/, oktaéderes feje, gallérral elfedett farka és komplex véglemeze van. Géles közegben a lízis - plakkok átmérője 65 4 1-2 mm, kerekek és szabályosak, középpontjuk világos és nincs r* kiónjuk. A baktériumokat szilárd táptalajra ülepítjük, melynek ôsszetételç^Iiterenként: „Difco proteose peptone No. 3. 10,0 g glukóz oldható keményítő NaCI NaH,P04 „Bacto” zselatin 1.2 g 6.0 g 3.0 g 2.0 g 13.0 g ,,Bacto”-agar 6,0 g Tisztított víz I literig. 24 óra múlva a vastag baktérium-pázsitot képező sejteket sterilen összegyűjtjük, megszámoljuk és a következő összetételű tápközegben újraszuszpéndáljuk: marhahúskivonat 2,5 g pepton 4,1 g NaCI r 7>° g kétszer desztillált víz 1 literig. A sűrűség 5.106 baktérium per ml. Egyidejűleg a homológ fágokat hozzáadjuk a tápközeghez. A fertőzés gyakorisága 0,01. A lízis kialakulását sejtszámláló segítségével követjük. Amikor ml-enként 102 baktérium nál kevesebb marad, körülbelül 0,22pm pórusméretű membránon átszűrjük a tenyészetek A lizátum-szűrlet képezi az immúnmoduláló preparátumot. Farmakológiai vizsgálat A találmány szerinti preparátumok állatra kifejtett aktivitását az 1. példában leírt eljárással kapott Escherichia coli lizátum-szűrlet alkalmazásával igazoljuk. A szűrletet liofilizáljuk, majd steril desztillált vízben újraoldjuk. Ezen új oldat koncentráció-faktorát a liofiüzálás előtti preparátumra vonatkoztatva fejez-, zük ki. Heveny baktériumos fertőzés elleni védőhatás Az immunrendszer teljes stimuláiását jelző próbát eltérő fertőző baktériumokkal hajtjuk végre. Ennek célja annak az igazolása, hogy a preparátum aktivitását nem egy esetleges vakcináié képesség vagy közvetlen bakteriofág jelenség okozza, hanem az immúnvédekezés stimulálása. Két baktériumot vizsgálunk, az intracellulárisan kifejlődő Klebsiella penumoniaet és az extracelluláris fejlődésű Staphylococcus aureust. A fertőző baktériumokat átlagosan 18 g testsúlyú Swiss-egerek 10-es csoportjainak adjuk be intraperitoneálisan, 0,5 ml térfogatban a nulladik napon /N0/ Az immúnmoduláló preparátumot a fertőzést megelőző napon /N.,/ fecskendezzük be, tehát preventív hatást vizsgálunk. A preparátumot intraperitoneálisan vagy intravénásán alkalmazzuk, hogy elkerüljük az esetleges po-
