193217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunmodulátor gyógyszerkészítmények hatóanyagának előállítására
193217 zitív eredményt, melyet az injekció helyén a preparátumnak a fertőző baktériumokkal való közvetlen interferenciája okozhat. A fertőző törzs virulenciájának — amely kísérletről kísérletre széles határok között vál-T. táblázat 7 tozhat — megismerése céljából minden kísérletnél meghatározzuk az LD50 értéket. Az I. táblázatban a preparátum heveny baktériumos fertőzéssel szembeni védőhatását mutatjuk be. 8 KEZELÉS TÚLÉLŐK (%-) Fertőző baktériumok LD*> Alkalmazás útja Térfogat Koncentráció dózisfaktora kezelt (n=10) kontroll (n=10) P Klebsiella 10''2 ip. 1,0 ml 1 X 0 10 NS 10'3 ip. 1,0 ml 1 X 70 30 0,050 1Ö'* ip. 1,0 ml 1 X 100 20 0,001 10'* iv. 0,5 ml 1 X 20 10 NS 10'3 iv. 0,5 ml 1 X 80 20 0,025 10~M iv. 0,5 ml 1 X 100 20 0,001 Staphylo-10's ip. 1,0 ml 1 X 10 10 NS coccus 10'3 ip. 1,0 ml 1 X 80 10 0,001 aureus 103 iv. 0,5 ml 1 X 10 20 NS 10 iv. 0,5 ml 1 X 100 30 0,001 NS = nem szignifikáns Makrofágok fagocitáló aktivitásának stimulálása A Halpern-próbában /Stiffel C., J. Phys. 58, 911-949 /1958// egereknek intravénásán kolloid szénrészecskéket fecskendezünk be, melyeket a máj és a lép retikuloendoteliális sejtjei nagy mértékben fagocitálrtak. Eltűnésük sebessége jellemző a fagocitáló aktivitásra. Az utóbbit úgy állapítjuk meg, hogy az idő függvényében fotometriásan meghatározzuk a vérben szabadon maradt részecskéket. Referenciaanyagként enterobaktériumból kivont és a makrofágokat hatásosan aktiváló lipopoli szacharid /LPS/ endotoxint alkalmazzuk A próbát a következőképpen hajtjuk végre: — 0,6 ml Escherichia coli szürletet vagy 0,625 pg/ ml töménységű LPS-oldatot átlagosan 24 g testsúlyú nőstény Swiss-egerek ötös csoportjainak adjuk be intraperitoneális úton. — 24 óra múlva 4% zselatinnal készült, 32 mg/ml töménységű kolloid szén-szuszpenzióból 0,12 ml-t fecskendezünk be intravénásán az egerekbe. — 12 percen át minden második percben vért veszünk a szemüreg mögül. E vérmintát azonnal felhígítjuk 4 ml 1 %-os Na2C03-oldattal. Az oldatot azután fotometráljuk. — A 620 nm-nél mért extinkciót leolvassuk. — A vérben levő kolloid szén koncentrációját a kísérlet t időpontjában egy előzetesen felvett standard görbe alapján határozzuk meg. A fagocitaindexet /F.I., fagocitózis mértékét kifejező szám/ a következő képlet alapján számítjuk ki: F T = l2S£&_I_l2S£i_ T2 - T., 35 40 45 50 55 ahol c? és c, a vérben levő kolloid szén koncentrációja az első* illetve utolsó vérvételkor, és T2 és T, a mintavételek időpontja. A II. táblázatban feltüntetett eredmények azt mutatják, hogy az egér peritoneális makrofágjainak aktivitása a preparátum intraperitoneális alkalmazása után stimulálódik. II. táblázat Kezelés Injekció Ip. térfogata Preparátum /E. coli bakteriofágos lizátumának szurlete/ 0,6 ml 0,028 ± 0,003 Be nem oltott tápfolyadék /negatív kontroll/ 0,6 ml 0,012 ± 0,001 LPS /pozitív referencia/ 0,6 ml 0,025 ± 0,002 Az interferon 10000-20000 dalton molekulasúlyú glükoproteid. Számos immúnmoduláló hatása van, így például stimulálja az NK/„Natural Killer”/ sejtek aktivitását. Az IFN részvételét a vírus elleni védekezésben már igazol- ‘ ták. 60 Miután a preparátumot 8 db 25 g-os nőstény Swiss-egérnek beadtuk, nem-heparinozott csőbe minden egértől 0,3 ml vért veszünk. A szérum-IFN-t szokásosan úgy határozzuk meg, hogy megmérjük a vizsgálandó szérum jelenlétében 24 órán át tenyésztett egér L-sejteket megfertőző VSV vírus /Vesicular Stomatitis 5
