193217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunmodulátor gyógyszerkészítmények hatóanyagának előállítására
193217 4 homológ lágjaik bevitele útján; előzetesen kalibrált sejtszámláló segítségével követjük a lízis lefolyását a tápközeg 1 ml-ére eső, előre meghatározott sejtszám eléréséig, azután eltávolítjuk a nem lizált baktériumokat és a baktériumtörmeléket, majd összegyűjtjük az imműnmodulátor preparátumot képező lizátum-szűrletet. A találmány szerinti eljárást a fentiekben említett nemzetséghez tartozó baktériumok egymásutáni alkalmazása útján hajtjuk végre. Egy alkalmas tápközeget először beoltunk Valamely Escherichia, Streptococcus, Klebsiella vagy Staphylococcus nemzetség inokulumával, a növekedési fázis folyamán a baktériumokat megfertőzzük homológ bakteriofágjaik bejuttatása útján, a lízist ismét egy meghatározott stádium eléréséig követjük, majd a tápközeget másodszor is beoltjuk valamely Escherichia, Streptococcus, Klebsiella vagy Staphylococcus nemzetséghez tartozó baktérium inokulumával, a második baktériumfajta növekedési fázisa folyamán e baktériumokat megfertőzzük homológ tágjaik bevitele útján, e második nemzetséghez tartozó baktériumok lízisét meghatározott stádiumig követjük, végül az ilyen típusú szeparálásokra alkalmas ismert eljárások segítségével eltávolítjuk a nem lizált baktériumokat és a baktériumtörmelékeket, és kinyerjük a két baktériumból származó lizátum szurletét. Ezen eljárás szerint például Klebsiella és Escherichia nemzetséghez tartozó baktériumok egymásutáni alkalmazásával állíthatunk elő gyógyszerkészítményt. Az alábbi példák ismertetik a találmányt, anélkül, hogy annak hatókörét korlátoznák. Az l.,2. és 4. példák a lízises eljárás kivitelezhetőségét támasztják alá különböző mikroorganizmusokkal. 1. példa Escherichia nemzetséghez tartozó baktériumból származó preparátum. A használt baktérium nemzetsége Escherichia, fajtája coli, savótípusa 0119: B 14, lajstromozta a párizsi Pasteur-intézet a 62.23 nyilvántartási szám alatt. A coli fág a C, morfológiai csoportba tartozik /az I.A.M.S. International Committee for Taxonomy of Virus, Taxonomie des Bactériophages" albizottságának nomenklatúrája/, izometriás /gömbszimmetrikus/ feje, nagyon rövid, nehezen kimutatható farka és nem kimutatható gallérja és véglemeze van. Géles közegben a lízis-plakkok átmérője 1 —1,5 mm, formájuk kerek, körvonalaik szabályosak, középpontjuk hálós és konfluens r* kiónjaik vannak. A tápközeg 1 literének összetétele: marhahúskivonat 2,5 g pepton 4,1 g NaCL 7,0 g Kétszer desztillált víz 1 literig. A tápközeget beoltjuk exponenciális növekedési fázisban levő baktériumok inokulu3 mával és a tenyészet kezdeti sűrűsége 106 baktérium per ml. Az inkubálást 37°C-on mérsékelt rázás közben hajtjuk végre. Az exponenciális növekedés fázisának közepén, azaz körülbelül a beoltás után 60 perc múlva a baktériumokat megfertőzzük homológ fágjaikkal. A fertőzés gyakorisága 0,02. A lízis kifejlődését előzetesen kalibrált sejtszámláló segítségével követjük. Amikor már kevesebb van 1000 baktérium per ml-nél, sterilező szűrést végzünk mintegy 0,22pm pórusméretű membránszürő segítségévet. A lizátum szűrlete képezi magát az immúnmódulátor preparátumot. 2. példa Streptococcus nemzetséghez tartozó baktériumból származó preparátum. Streptococcus nemzetséghez, faecalis fajtához, zimogén változathoz tartozó baktériumot használunk, melyet a párizsi Pasteur-intézet lajstromozott az 53.152 nyilvántartási szám alatt. A .fág.az A, morfológiai csoportba tartozik /az I.A.M.S. International Committee for Taxonomy of Virus, Taxonomie des Bactériophages albizottságának nevezéktana/, feje izometriás, farka hosszú, gallérja látható és a véglemez komplex. Géles közegben a lízisplakkok kerekek, 0,8 mm-nél kisebbek, körvonalaik szabályosak és középpontjuk világos. Vagy egyáltalában nincs r* kiónjuk, vagy csak egy van. Literenként a tápközeg összetétele: marhahúskivonat 0,3 g triptikáz 1,0 g glükóz 1,0 g NaCl 0,5 g Kétszer , desztillált víz 1 litt A tápközeget stacioner növekedési fázisban levő baktériumok inokulumával oltjuk be és a kezdeti sűrűség 107 baktérium per ml. 37°C-ra, sötétbe helyezzük, mérsékelt rázást alkalmazva. Az exponenciális növekedés kezdetén, azaz körülbelül 40 perccel a beoltás után a baktériumokat megfertőzzük homológ fágjaikkal. A fertőzés gyakorisága 0,1. A lízis kialakulását sejtszámláló segítségével követjük. Amikor ml-enként 10-nél kevesebb baktérium marad, a tenyészetet fertőzésmentesen 5000xg gyorsulással lecentrifugáljuk a lizogén /proíágot tartalmazó/ baktériumok és a nem lizált baktériumtestek eltávolítása céljából. A felülúszó tartalmazza az immúnmoduláló preparátumot, 3. példa Klebsiella és Escherichia nemzetségbe tartozó baktériumok egymásutáni alkalmazásával előállított preparátum (SL04) A Klebsiella nemzetségbe tartozó, penumoniae fajtájú baktériumot a párizsi Pasteur-intézet lajstromozta 58.5 nyilvántartási szám alatt. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
