193078. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emberi leukocita interferon előállítására
1. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag zacskókba gyűjtöttük. Az összegyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten 3000 g gyorsulásnál rögtön centrifugáltuk, azért hogy az eritrocitás masszától elválasszuk a plazmát. A plazma eltávolítása után összegyűjtöttük az eritrocitás massza 75%-át kitevő felső részt, és 0,83%-os ammónium-klorid-oldat háromszoros térfogatmennyiségében reszuszpendáltuk. Az elegyet 500 g gyorsuláson centrifugáltuk, és a csapadékot ismét 0,83%-os ammónium-klorid oldat tízszeres térfogatában reszuszpendáltuk és 150 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az így előállított leukocita csapadékot Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk. A tápközeg 107 sejt/ml koncentrációban 4% emberi vérszérumot tartalmazott. 1 liter vérben 5.0X109 sejt volt 3 leukocita kitermelés, vagy a teljes vérben 80%-os leukocita tartalmat állapítottuk meg. Az Eagle MEM tápközegben reszuszpendált leukocitákat 37°C hőmérsékleten 2 óra alatt 200 IE/ml emberi leukocita interferonnal kezeltük. Ezután a leukocita szuszpenzióhoz induktorként a Newcastle betegséget előidéző vírust adtuk. A vírust 20 hemagglutináló egység/1 ml dózisban alkalmaztuk. Az elegyet 1 órán keresztül 37°C hőmérsékleten inkubáltuk. Az inkubálási idő eltelte után a sejteken nem adszorbeálódó vírusokat 600 g gyorsuláson centrifugálással elválasztottuk. Az így keletkezett sejtcsapadékot Eagle MEM tápközegben 5,5X10® sejt/ml koncentrációban reszuszpendáltuk. A tápközeg 4% emberi vérszérumot tartalmazott. A sejtszuszpenziót 37°C hőmérsékleten állandó keverés közben 20 órán keresztül inkubáltuk. Az inkubálás befejeződése után a tenyésztő folyadéktól centrifugálással 1500 g gyorsuláson elválasztottuk a termelő sejteket. A sejtcsapadék elválasztása után a tenyésztőfolyadékot 3 napig 4°C hőmérsékleten — az induktor vírus inaktiválása érdekében — savas közegben állni hagytuk, majd megmértük az interferon titerét. Egv liter vérben 8X106 IE interferon kitermelést tapasztaltunk. 2. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag tasakokba gyűjtöttük. A gyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten és 2000 g gyorsuláson rögtön centrifugáltuk, azért, hogy az eritrocit'ás masszából a plazmát elválasszuk. A plazma eltávolítása után az eritrocitás massza 75%-át kitevő felső részét összegyűjtöttük és 0,83%-os ammónium-klorid oldat 25 térfogatnyi mennyiségével reszuszpendáltuk. Az elegyet 250 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az így előállított sejtcsapadékot 0,83%-os ammónium-klorid 3 térfogatnyi mennyiségével reszuszpendáltuk, és 150 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az ily módon előállított leukocitacsapadékot olyan Eagle MEM tápközegben reszusz-3 pendáltuk, amely 107 sejt/ml koncentrációban 4% emberi vérszérumot tartalmazott. Egy liter vérben 5,0X10® sejt volt a leukocita kitermelése, vagyis a teljes vérmennyiségre vonatkoztatva 80% leukocita tartalmat állapítottunk meg. Az indukciót és az interferon bioszintézisét az 1. példához hasonló módon folytattuk le. 1 liter vérben az interferon kitermelése 1.2X107 IE volt. 3. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag tasakokba "összegyűjtöttük. Az összegyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten 2000 g gyorsuláson rögtön centrifugáltuk, azért, hogy az eritrocitás masszából a plazmát elválasszuk. A plazma eltávolítása után az eritrocitás massza 75%-át kitevő felső részét összegyűjtöttük, és 0,80%-os ammónium-klorid oldat 50 térfogatnyi mennyiségében reszuszpendáltuk. Az elegyet 4°C hőmérsékleten 10 percig állni hagytuk, és 150 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az így előállított sejtcsapadékot Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk. A tápközeg 10' sejt/ml koncentrációban 4% emberi vérszérumot tartalmazott. '1 liter vérben 4X109 sejt leukocita kitermelést állapítottunk meg, vagyis a teljes vérmennyiségre számítva 70%-os leukocita tartalmat mértünk. Az indukálás és az interferon bioszintézise az 1. példához hasonló módon történt. 1 liter vérben 8X106 IE interferon kitermelést állapítottunk meg. 4. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag tasakokban összegyűjtöttük. Az összegyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten 1500 g gyorsuláson rögtön centrifugáltuk azért, hogy az eritrocitás masszából a plazmát elválasszuk. A plazma eltávolítása után az eritrocitás massza 75%-át kitevő felső részét összegyűjtöttük és 0,84%-os ammónium-klor d oldat 3 térfogategységnyi mennyiségében reszuszpendáltuk, és^ 2500 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az így előállított leukocita csapadékot 0,84%-os ammónium-klorid 20 térfogat-egységnyi mennyiségében reszuszpendáltuk, és 150 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az ily módon előállított leukocita csapadékot olyan Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk, amely 107 sejt/ml koncentrációt 4% emberi vérszérumot tartalmazott. 1 liter vérben 3X109 sejt leukocita kitermelést állapítottunk meg, vagy a teljes vérmennyiségre számítva r0% ossz leukocitatart ilmat mértünk. Az indukálás és a; terferon bioszintézise az 1. példához hasonló módon történt. 1 liter vérben 6X106 IE interferon kitermelést állapítottunk meg. 5. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag tasakokban összegyűjtöttük. Az 4 3 193078 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
