193078. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emberi leukocita interferon előállítására
5 193078 6 összegyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten 5000 g gyorsuláson rögtön centrifugáltuk azért, hogy az eritrocitás masszából a plazmát elválasszuk. A plazma eltávolítása után az eritrocitás massza 15%-át kitevő felső részét 0,8%-os ammónium-klorid oldat 3 térfogategységnyi mennyiségében reszuszpendáltuk. Az elegyet 250 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az így előállított sejtcsapadékot 0,83%-os ammónium-klorid oldat 10 térfogategységnyi mennyiségében reszuszpendáltuk, és 150 g gyorsuláson centrifugáltuk. Az ily módon előállított leukocitacsapadékot Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk. A tápközeg 107 sejt/ml koncentrációban 4% emberi vérszérumot tartalmazott. A leukocita kitermelése 5X109 sejt/1 liter vér, vagy a teljes vérmennyiségre számítva 80% ossz leukocita tartalmat állapítottunk meg. Az indukálás és az interferon bioszintézise az 1. példához hasonló módon történt. 1 liter vérben 6X106 IE interferon kitermelést állapítottunk meg. 6. példa A véradók vérét stabilizátort tartalmazó műanyag tasakokban összegyűjtöttük. Az összegyűjtés után a vért 4°C hőmérsékleten és 2000 g gyorsuláson rögtön centrifugáltuk azért, hogy az eritrocitás masszából a plazmát elválasszuk. A plazma eltávolítása után a buffy coat-ot összegyűjtöttük, és stabilizátort tartalmazó üvegcsövecskékbe töltöttük. Az elegyet 160 g gyorsuláson centrifugáltuk, és a leukocita csapadékot elválasztottuk. A csapadékot 10% emberi vérszérumot tartalmazó 10 ml Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk. Az így keletke- 5 zett szuszpenzióhoz adtuk a stabilizátort és az eritrocita hemolízis érdekében a szuszpenziót összekevertük 0,83%-os ammónium-klorid oldat 8 térfogategységnyi mennyiségével. Néhány perc eltelte után az elegyet 160 g 10 gyorsuláson centrifugáltuk. Az így keletkezett leukocitacsapadékot 107 sejt/ml vérkoncentrációig friss Eagle MEM tápközegben reszuszpendáltuk. Egy liter vérben a leukocita végkitermelése 0,9X109 15 sejt volt, vagy a teljes vérben 15% leukocita tartalmat mértünk. Az indukálás és az interferon bioszíntézisét az 1. példához hasonló módon végeztük. 1 liter vérben 4X106 1E interferon kiter- 20 melést állapítottunk meg. így a találmány szerinti eljárással jelentős interferon kitermelés növekedést értünk el. Találmányunkat a gyógyászati iparban is sikeresen lehet alkalmazni. SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás emberi leukocita interferon előállítására, amelyben a vért centrifugáljuk, a leukocitát elválasztjuk, az interferont bio- 3Q szintetizáljuk, és a végterméket izoláljuk, azzal jellemezve, hogy a vér centrifugálását 1500—5000 g gyorsuláson végezzük, és a leukocita elválasztásához a leukocitát tartalmazó eritrocitás massza 15—75 térfogat%-át kitevő 35 felső részét leszedjük. Rajz nélkül Kiadja: Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezetí) JV° 3498. Nyomdaipari vállalat, Uzsgorod
