193053. lajstromszámú szabadalom • Eljárás limfotoxin és limfotoxin-mRNS előállítására

1

193053

2

den vizsgálatban két parallel edényt használunk, az egyikhez limfotoxint, a másikhoz tápoldatot adunk). Három sejtvonal esetében a

sejtszámot naponta meghatároztuk. Az ered ményeket a következő táblázat, illetve a 3. áb ra tartalmazza.

Táblázat

Faj

Sej tvonal

Inkubálás időtartalma (nap)

Sej tszám/tenyésztő edény (3 mm0)

10 5 x sejt/edény Kontroll Limfotoxin

Ember

Hela

4

8,1

0,6

Hep-2

3

9,3

2,1

A-549

4

10

3,4

Máj om

GL-V3

3

5,6

4,5

Verő

3

6,3

5,3

Egér

L929

4

8,5

3,1

IT22

3

13

4,0

B16

4

19

4,9

Nyúl

RK13

3

4,6

3,5

A táblázatból, illetve ábrából látható, hogy az 1670 sejtek tenyészeteinek felülúszói megtudják gátolni különböző fajok tumorsejtjeinek szaporodását. Ez a tulajdonság jellemző a limfotoxinokra [Evans, Cancer Immunoi. Immunother., [2, 181-190 ( 1983) ];

s ez különbözteti meg ezt a csoportot azoktól a proteinektől — különösen az interferonoktól — amelyek ugyancsak gátolják a tumorsejtek növekedését, de általában fajspecifikusak és ezért különösen a humán interferon például, az egérsejtekre nagyon kevéssé vagy egyáltalán nem hat.

Az előbb felsorolt transzformált emberi T- limfocita sejtvonalak, valamint a (tumor-) sejtvonalak a szakirodalomból ismertek.

Az 1670 sejtvonalat 1984. március 28-án letétbe helyeztük 1-294 letéti szám alatt a párizsi Pasteur Intézetben, a „Collection nationale de cultures de microorganismes (C.N.C.M) “

gyűjteményben, az Európai Találmányi Egyezmény 28. szabálya értelmében.

2. példa

Limfocita termelés növelése diterpén vegyületekkel majom-T-limfoeita sejtvonalakban

Sűrű tenyészeteket 1:2 — 1:3 arányban hígítunk friss tápoldattal, a következő napon mégegyszer 1:3 arányban hígítunk és ugyanabból a törzstenyészetből 5 ml-eket osztunk el három edénybe. Hozzáadjuk a stimulátorokat (100 pg/ml töménységű törzsoldatok dimetilszulfoxidban) és a tenyészeteket három napig inkubáljuk. Ezután a sejteket centrifugálással távolífjuk el , a felületúszókat lefagyasztjuk és -20° C-on tároljuk a limfotoxin teszteléséig.

Két daganat-keltő diterpént választottunk ki, a TPA-t és a mezerein-t és ezeknek a kiválasztott majom-T-limfocita sejtvonalak limfotoxin termelésére gyakorolt hatását mutatjuk be a következő táblázatban:

35

40

45

50

55

Sejtvonal Kísérlet Koncentráció A felülúszó limfotoxin

(pg/ml) aktivitása (RE/ml)

Kontroll TPA Mezerein

1670

1

20

83

520

270

2

20

77

210

76

3

100

88

340

370

5