193017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új poliéter típusú antibiotikum előállítására
193017 2 teres Erlenmeyer-lombikokat percenkénti 250-es fordulátszámmal működő forgó rázatógépen 28°C-on 4 napón át inkubáljuk. Az ily módon kapott vegetatív tenyészet 4 literes mennyiségét használjuk fel 454 literes /100 gallonos/ fermentorban levő, alábbi összetételű, 227,1 liter /60 gallon/ termelő táptalaj inókulálására. Komponens Mennyiség, g/1 “ csapvíz Cerelóz /technikai minőségi glükóz/ 20,0 Szójalóz/kereskedelmi forgalomban levő szójababliszt; gyártó cég: Centrál Soya Company/ 10,0 Nátrium-szulfát 1,0 Kalcium-karbonát 0,2 Kobalt-klorid-hexahidrát /CoCl2.6H20/ 0,001 SAG 4130 habzásgátló/szükség szerint adjuk hozzá a fermentáció alatt/. A pH-t sterilezés előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az inokulált tank-fermentort 3 m3/perc levegővel levegőztetjük és percenként 280 fordulatszámmal működő keverővei keverjük. A fermentációt 28° C -on 97 órán át végezzük. 2. példa Az X-14934A nátrium-sójának izolálása A-lépés C-lépés A B-lépésnél nyert olajat metilén-kloridban oldjuk és 500 g szilikagélt /Davison 62/ tartalmazó, metilén-kloriddal töltött oszlopra 5 visszük fel. Az oszlopot 2 liter metilén-kloriddal, 4 liter 7:3 arányú etil-acetát/hexán eleggyel, 2 liter 95:5 arányú etil-acetát/metanol eleggyel és 2 liter 9:1 arányú etil-acetát/metanol eleggyel eluáljuk. 1U 20 ml-es frakciókat veszünk le és a 490—512. sz. frakciót összegyűjtjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot /8 g/ 250 g szilikagélt tartalmazó, metilén-kloriddal töltött oszlopon kromatografáljuk. Az 15 oszlopot 2 liter dietil-éterrel és 2 liter 20:0,5 arányú dietil-éter/etanol eleggyel eluáljuk. 20 ml-es frakciókat veszünk le. A 227,1 literes fermentáció /1. példa/ teljes fermentlevéhez 139 órás fermentálás után azonos térfogatú etil-acetátot adunk. Az elegyet ega órán át keverjük, majd az oldószeres réteget elválasztjuk és a vizes fázist azonos térfogatú etil-acetáttal ismét extraháljuk. A két oldószeres fázist egyesítjük és vákuumban 2,6 literre bepároljuk. B-lépés Az etil-acetátos extraktumot bepároljuk. A visszamaradó olajat n-hexánban oldjuk és azonos térfogatú acetonitrillel ötször, majd 9:1 arányú acetonitril-metanol eleggyel egyszer extraháljuk. Az acetonitriles és 9:1 arányú acetonitril-metanol elegyes extraktumokat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, majd 1 n sósavval, szobahőmérsékleten telített nátrium'-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. Az oldószeres fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. 38 g olajos maradékot nyerünk. 20 25 30 35 A C-lépésnél a 250 g szilikagélt tartalmazó oszlopról eluált 60—100. sz. frakciót egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot acetonitril-víz elegyből kristályosítjuk. A kapott kristályos X-14934A-antibiotikum-nátr um-só 156—158°C-on olvad. Mikroanallzis: C48H79015Na.2H20 képletre /955.18/: számított: C%=60,36; H%=8,76; Na%=2,41 ; H20%=3,77; talált: C% =60,62; H%=8,96; 60,90; 9,11; Na%=2,34; H20%=4,52. 3. példa Az X-14934A-antibiotikum rubidium-sójának előállítása 40 100 mg X- 14934A-antibiotikum-nátriumsó netilén-kloridos oldatát előbb 1 n sósavval, majd vízzel, végül vizes rubidium-hidroxid-oldattal négyszer mossuk. Az oldószeres fázist celiten történő átszűréssel tisztítjuk és vákuumban bepároljuk. A marab cékot víz hozzáadása közben acetonitrilből t ristályosítjuk. Átkristályosltás után röntgen-analízisre alkalmas kristályokat nyerünk. 50 Analízis : /C 48^79 015/2Rb/H20/2 képletre: számított: C%=60,25; H%=8,53; Rb%=4,47; H20% = 1,88; talált: C%=59,73; H%=8,41; Rb%=4,63; H20% = 1,74. 55 A só konfigurációját röntgen-analízissel igazoltuk. Az X-14934A antibiotikum antimikróbás aktivitását a II. táblázatban mutatjuk be: Mikroorganizmus II. táblázat ATCC szám Minimális gátlási koncentráció /MGK/X /MCG/ml/ G-pálcikák 4 Pseudomonas aeruginosa 8705 Proteus vulgaris 6380 >1000 >1000
