193017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új poliéter típusú antibiotikum előállítására
193017 /1 / A szín-kód irodalmi helye: Color Harmony Manual 4. kiadás, Container Corporation of America, 1958. 3. Fiziológiai jellemzők Az X-14934 mikroorganizmus egyetlen szénforrásként glükózt, L-arabinózt, szacharózt, i-inozitot, mannitot, fruktózt, ramnózt és raffinózt hasznosít, míg xilózt kevésbé hatékonyan értékesít. A cellulóz-hasznosítás negatív. A kén-hidrogén termelés pozitív/ezt pepton-élesztőextrakt-vas-agar táptalajon — ISP 6 - fellépő sötétedés jelzi/. Tirozintartalmú táptalajon /ISP 7/ sötét szín /melamin/ alakul ki. A nitrát-redukció negatív. A zselatin-, keményítő- és kazein-hidrolízis pozitív; 3,5% vagy nagyobb nátrium-klorid koncentráció mellett nincs növekedés. 4, Ismert Streptomyces törzsekkel való összehasonlítás A spóramassza színe, a spóraláncok alakja, a spóra felülete, a melanoid pigmentek termelése és a telepek ugyanazon táptalajon mutatott higroszkópikus jellege, valamint a szénforrás hasznosítás alapján az X-14934 törzs Streptomyces hygroscopicus fajhoz tartozik. A Streptomyces hygroscopicus X-14934 mikroorganizmus megfelelő körülmények között végzett fermentáció esetében X-14934A antibiotikumot termel. A Streptomyces hygroscopicus X-14934 tartalmú fermentlevet oly módon állíthatjuk elő, hogy az antibiotikum termelésére képes mikroorganizmus spóráit vagy micéliumát megfelelő táptalajba inokuláljuk, majd aerob körülmények között tenyésztjük. Az antibiotikum szilárd táptalajon is előállítható, azonban nagy antibiotikum mennyiség gyártása esetén előnyösen folyékony táptalajokkal dolgozhatunk. A tenyésztést tág hőmérsékleti határok között végezhetjük el; általában 20—35’C -on, előnyösen 26—30°C°-on dolgozhatunk. Az eljárást előnyösen semleges körüli pH-értéken végezhetjük el. Az X-14934A antibiotikum szubmerz aerob fermentációval történő gyártásához felhasznált táptalaj szénforrásként kereskedelmi forgalomban lévő glicerid-olajokat vagy nyers vagy tisztított szénhidrátokat /pl. glicerint, glükózt, maltózt; laktózt, dextrint, keményítőt stb./, nitrogén-forrásként szerves anyagokat /pl. szójabablisztet, desztillációnál nyert oldható anyagokat, mogyorólisztet, gyapotmaglisztet, húsextraktumokat, peptonokat, hallisztet, élesztő extraktumokat, kukoricalekvárt stb./és kívánt esetben szervetlen nitrogén-forrásokat /pl. nitrátokat, ammónium-sókat és ásványi sókat, mint pl. ammónium-szulfátot, magnézium-szulfátot stb./ tartalmazhat. A táptalaj továbbá nátrium-kloridot, kálium-kloridot, kálium-foszfátot stb. ) és pufferező anyagokat /pl. nátrium-citrátot, kalcium-karbonátot vagy foszfátokat / vagy nyomnyi mennyiségben nehézfémsókat is tartalmazhat. A levegőztetett szubmerz fermentációs eljárásoknál habzásgátlókat is adhatunk a rendszerhez/pl. folyékony parrafint, zsíros olajokat vagy szilikon-vegyüieteket stb./ Az X-14934A antibiotikum gyártásához egynél több szén-forrást, nitrogén-forrást vagy habzásgátlót is alkalmazhatunk. Az X-14934A antibiotikum nátrium-só-monoh drát toxicitása /LD50/ egéren 25 mg/kg /p.o./ és 7,75 mg/kg /i.p./. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa Streptomyces hygroscopicus X-14934 mikroorganizmust alábbi összetételű ferde keményítő-kazein-agar táptalajon tenyésztünk: Komponens Mennyiség, g/1 desztillált víz Oldható keményítő 10,0 Kazein 1,0 Dikálium-hidrogén-foszfát /K2HPO,/ 0,5 Magnézium-szulfát 0,5 Agár 20,0 A pH-t autoklávozás előtt 7,4-re állítjuk be /NaOH/. Az X-14934 törzzsel inokulált ferde táptalajt 28’ C -on 7—14 napon át inkubáljuk. Vegetatív inokulumot oly módon készítünk, hogy az inkubált ferde tenyészet spórákat és micéliumot tartalmazó részletét 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő, 100 ml mennyiségű alábbi összetételű táptalajba inokuláljuk. Komponens Mennyiség, g/1 csapvíz Szójalóz/kereskedelmi forgalomban levő szójababliszt; 2 gyártó cég: Centrál Soya Company/ 10,0 Cerelóz /technikai minőségű glükóz/ 10,0 Nátrium-szulfát 1,0 Kalcium-karbonát 0,2 Kobalt-klorid-hexahidrát /CoC12.6H20/ 0,001 A pH-t sterilezés előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az inokulált táptalajt 28 °C -on 4 napon át inkubáljuk, percenkénti 250-es fordulatszámmal működő forgó rázatógépen. A kapott tenyészet kétszer 30 ml-es mennyiségét használjuk fel 2 db 6 literes Erlenmeyer-lombikban levő 2-2 liter, fenti összetételű táptalaj inokulálására. Az inokulált 6-li-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
