192962. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy gonadotróp aktivítású leteinizáló és ösztron-stimulálo hormonokat felszabaditó faktor analógok előállítására
2 192962 3 Találmányunk tárgya eljárás új (I) általános képletű nagy gonadotrop aktivitású, luteinizáló és ösztron-stimuléló hormonokat felszabadító faktor analóg előállítására. 12345 678 9 pClu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tle-Leu-Arg-Pro-NH-Et (I) I X mely képletben X jelentése hidrogénatom vagy egy védőcsoport, előnyösen p-toluol-Bzulfonil-csoport (tozil-cBoport). A többi rövidítés jelentése a következő: Et etil-csoport, pGlu piroglu tamil- sav, His hisztidin, Trp triptofán, Ser szerin, Tyr tirozin, D-Tle l-amino-3,3-dimetil-D-butánsav (terc-leucin), Leu leucin, Arg arginin és Pro prolin. Az új biológiailag aktív nonapeptidek nagy gonadotrop aktivitással rendelkeznek, és a humán- ób állatgyógyászatban egyaránt használhatók az ivarzási ciklus ellenőrzésére, ivarzással kapcsolatos zavarok kezelésére, és nem szteroid fogamzásgátlóként is. Ismeretes, hogy a luteinizáló és ŐBztronstimuláló felszabadító faktor (LRF) a hipotalamusz révén jön létre és az LH + FSH- nek a hipofízis elülső lebenyében való felszabadulását segíti elő. A felszabadult LH + PSH szabályozza mindkét nemű emberek illetve állatok szteroid hormon szintjét. LRF receptorokat közvetlenül az ivarmirigyek környékén is találtak. Ennek (mármint a felszabadulás) ellenére olyan aktív LRF analógokat találhatunk a humán- és állatgyógyászat területén, amelyeket pld. funkcionális sterilitás vagy petefészek cisztakezelésére használnak. Emellett néhány LRF analóg megnövekedett és tartós működése az ellenkező hatáshoz vezethet, vagyis visszaszoríthatja az ovulációt és a spermatogenézist. A természetes LRF dekapeptid 1234567 8 9 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHí pGlu-His, Tyr-Gly éa Pro-Gly kötéseinek felnyílása következtében gyors enzimatikus lebomláson megy ét. Ezért megkísérelték, hogy az ezekben a kritikus pozíciókban lévő aminosav-csoportok különböző szubsztituálása révén rezisztensebb analógokat állítsanak elő, amelyek módosult vagy megnövekedett és hosszabb ideig tartó hatással rendelkeznek, így például a 6-os helyzetben lévő Gly-nek különböző nem proteinBzerű D-aminosavakkal vagy ezek származékaival, különösen bizonyos lipofil tulajdonságú származékaival való helyettesítése ellentétesen nagy aktivitású vegyületekhez vezetett. A 10-es helyzetben lévő Gly-NH2 egyidejű megfelelő alkil-csoporttal való helyettesítése látszólag az LRF hatás növekedéséhez, az úgynevezett „szuper-aktív” analógokhoz vezetett. Ezek kis dózisban petefészek-zavarok kezelésére, és tejelő tehenek irányított reproduktív szerveiben az ovuláció megindítására alkalmasak. Ezeket az anyagokat nagy dózisban például farmon tartott állatok ivarzási ciklusában szabályozott megszakítására, nem szteroid fogamzásgátlóként és néhány endokrin-függő tumor kezelésére használják. A szerkezet (többek között az új szerkezeti változatok) és a hatás közötti összefüggés tartós, szisztemetikus megfigyelése olyan LRF analógokhoz vezetett, amelyek nagy biológiai potenciállal rendelkeznek és a gyógyászatban is valószínűleg felhasználhatók. így találmányunk szerint a természetes LRF 6-os helyzetű glicin-csoportját egy D-konfiguréciójú új kétértékű aminosav-csoporttal helyettesítünk. Az aminosav ilyen összefüggésében az irodalomban még sehol nem szerepelt. A fent említett aminosav az 1- -emino-3,3-dimetil-D-butánBav (terc-leucin) volt. Alifás oldallánc szerkezete jelentős lipofil tulajdonsággal rendelkezik és sztérikus szempontból jelentősen gátolt. Mindkét tulajdonsága kedvező hatást gyakorol az LRF analóg tulajdonságaira, különösen hatásuk nagyságára és időtartamára. Az így nyert 6- -D-Tle LRF analóg sokkal stabilabb a metaboliku8 hatásokkal szemben és hosszabb ideig hat, mint azok az analógok, amelyek 0- -terc-butil-D-szerin csoportot vagy aromás oldalláncot tartalmaznak, például 3-(2-nafti))-I)-alanint. A 10-Gly-NH2 rész legkedvezőbben NHEt csoporttal helyettesíthető. A részlegesen védett LRF analóg prekurzorok a megfelelő nem-védett vegyület aktivitásának jelentős részét megőrzik, így a szabad Arg jelenléte a lü-es helyzetben nem kritikus, nem fejt ki nagy ellentétes hatást. Ennek a felfedezésnek a további jelentősége abban áll, hogy különösen az állatgyógyászatban lehetőséget ad arra, hogy a megfelelő biológiai hatást ezeknek a könnyebben hozzáférhető és kevésbé drága szintetikus prekurzoroknnk a használata révén érjük el. Hasonló találmányokról már korábban beszámoltak néhány LRF analóg ellenkező előjelű, inhibitor hatásával kapcsolatban. Az LRF analóg (VI) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tle-Leu-Len--Arg(Tos)-Pro-NH-Et (VI) és (VII) pGlu-HÍ8-Trp-Ser-Tyr-D-Tle-Leu-Arg-Pro-NH-Et (VII) képletű vegyületekkel 10 és 200 jug-os dózisokban kezeltek olyan nőket, akiknek nem volt petefészkük. A RIA próbát dupla, antitestek homológ rendszerében végezték el [Strupnicki R., Mladej A.: Andocrinology 68, 6 (1976)]. A szarvasmarha NIHLER-1716-2 készítményt használták jódozási standardként, a RIA érzékenység 100 jug fölött volt. Az STH-prolaktin keresztreakció 5 10 15 20 25 30 35 40 15 50 55 60 65 3
