192806. lajstromszámú szabadalom • Rejtett vér kimutatására alkalmas tökéletesített teszlemez és eljárás a vér kimutatására
4 192806 5 megváltoznak. Amennyiben a kifejlesztő oldatot pufferoljuk, a tesztlemez előállítása változtatás nélkül, egyformán történhet, ennek pedig kedvező költségkihatása van. Még előnyösebb eredményeket értünk el savval kezelt gvajakoloe papír és pufferolt kifejlesztő oldat együttes alkalmazáséval. Arra a felismerésre juttatunk, hogy a gvajakolos papír savas kezelésére megszűnteti a cimetidin és csökkenti a peroxidáz jelenléte folytán fellépő téves pozitív eredményeket. Ezen kívül - nam várt módon - a sav jelenléte a gvajakoloe papíron megvédi a papírt a tárolás közben való megkéküléstől, ami a levegő oxigénje hatására következik be. A hemoglobinnak savas gvajakollal való kimutatásához pufferolt előhívó oldat szükséges. Ezt igazolják a következő kisérletek eredményei. 0,05 mg/ml hemoglobint és 30 mg/ml cimetidint tartalmazó szintetikus gyomorfolyadék mintákat készítettünk. 25 ul mintát „Hemoccult” lemezre vittünk és pufferolt vala- 5 mint nem pufferolt kifejlesztő oldattal előhívtuk. Ezután olyan gvajakolos lemezekkel végeztük el a vizsgálatot, melyet a minta felvitele éB kifejlesztése előtt savval kezeltünk. Ezeknek a vizsgálatoknak az eredményét az 10 1. és a 2. táblázatokban mutatjuk be. 1. táblázat 15 Pufferolt és nem pufferolt kifejlesztő oldat összehasonlítása az ismert „Hemoccult" lemezen, 30 sec elteltével végezve az értékelést. Minta Hemoglobin Cimetidin pH-ja pufferolt nem pufferolt pufferolt nem pufferolt 1.32 3 1 0 1 2.20 3 3 0 2 3.60 4 4 0 2 4.32 4 4-0 2 5.60 4 3 0 4 6.37 4 3 0 4 8onlítása pufferolt kifejlesztő oldat alkalma-2. táblázat zásával Savval kezelt és nem kezelt lemezek összeha- 35 Lemez savas Hemoglobin sav nélkül savas Cimetidin sav nélkül Leolvasás ideje (perc) 0.5 2 5 0.5 2 5 0.5 2 5 0.5 2 5 1.32 2 5 5 3 5 5 0 0 0 0 0 0 5.60 5 5 5 5 5 5 0 0 0 0 1 5 6.37 5 5 5 4 5 5 0 0 0 0 3 5 A „Hemoccult" lemezeket a gvajakolos 50 papír közepére felvitt 25 pl 0,1 M-os citromsavval megsavanyítjuk. A papírt használat előtt szobahőmérsékleten megszárítjuk. A pufferolt kifejlesztő oldat pH 5,8-as, 0,2 M-os citromsav/citrát pufferben hidrogén-peroxi- 55 dot tartalmaz. Nem pufferolt kifejlesztő oldatként a kereskedelmi forgalomban lévő „Hemoccult" kifejlesztő oldatot használjuk, mely oldat etanolban éa vízben oldott hidrcgén-peroxidot tartalmaz. A kék szín intenzitását 1-5 fokozatba soroltuk, a 0 jelölés Bzintelen tesztet jelent. Az 1. táblázatból látható, hogy az iámért „Hemoccult" tesztlemezen, pufferolt kifejlesztő oldat alkalmazásával következetesebben 65 jelentkezik - hemoglobin jelenlétét jelző pozitív eredmény. A pufferolt előhívó a cimetidin hatására jelentkező téves pozitív eredményeket is kiküszöböli. A 2. táblázatban ismertetett eredmények azt mutatják, hogy savval kezelt gvajakolos papíron, pufferolt kifejlesztő oldat alkalmazáséval cimetidin hatására még akkor sem jelentkezik téves pozitív eredmény, ha a teszt értékelését az optimálisként megadott 30 másodpercnél később 60 végezzük. Meg kívánjuk jegyezni, hogy ez a kezelés nem okoz zavart a hemoglobin kimutatásában. A peroxidáz által katalizált téves pozitív reakció Bzintén pH-függő, a katalízis mértéke a pH csökkenésével csökken. Felismertük, 4
