192806. lajstromszámú szabadalom • Rejtett vér kimutatására alkalmas tökéletesített teszlemez és eljárás a vér kimutatására
2 192806 3 A találmány tárgya rejtett vér kimutatására alkalmas tökéletesített tesztlemez és eljárás a vér kimutatására. A rejtett vér székletből való kimutatáséra alkalmas tesztlemezek és a kimutatásra szolgáló eljárás jól ismertek. A 3 996 006 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban például olyan tesztlemezt ismertetnek, melynek elülső és hátulsó lemeze között egy lap van, az elülső lemezen egy vagy több, a hátulsó lemezen egy nyílással, amelyek elforgatható fedővel lefedhetők. A rejtett vér székletből való kimutatásánál szokásos módon mintát hordozó lapként impregnált vagy gvajakollal átitatott abszorbeáló papírt, kifejlesztő oldatként pedig peroxidoldatot használnak, mely oldatot a hátulsó lemez nyílásán át juttatnak be a papírra. Ilyen tesztlemez „Hemoccult" márkanéven van a kereskedelmi forgalomban. A vizsgálati eljárás röviden összefoglalva a következő. A Bzékletmintát az elülső lemez egyik nyílásán át a gvajakolos papírra kenik. Ezután a nyílást lefedik és a hátulsó lemezen lévő nyílást kinyitják. Ezen a nyíláson keresztül bejuttatják a gvajakolos papírra az előhívó oldatot, például a hidrogén-peroxidot. Ha a székletben vér van jelen, a gvajakollal adott reakció folytán a papír megkékül. A kék szín a gvajakolnak hemoglobinnal katalizált oxidációja folytán jelenik meg. Gvajakol H1O2 „Oxidált gvajakol" Színtelen Hemoglobin Kék színű A gvajakol teszt használhatóságát korlátozó tényező, hogy a hemoglobinnal katalizált kék szín képződés pH függő reakació. A kifejlesztő oldat bizonyos pH érték alatt nem reagál reprodukálhatóan. Ez az ismert rendszer pH 4,0-7,0 tartományban működik megbízhatóan, legelőnyösebben az 5,5-6,0 pH tartományban. Így, ha a hemoglobint a gvajakolos papírra az optimálistól jelentősen eltérő pH-jú közegben vesszük fel, nem mutatható ki a kék szín, vagy csak igen halvány lesz. Ezen hátrányok következtében az ismert tesztlemez nem használható a rejtett vér kimutatására alacsony pH-jú mintákból, például a gyomornedvból, melynek pH-ja 2,0 alatt lehet. Az olyan anyagok kimutatása, melyek normál állapotban nincsenek jelen a gyomortartalomban, különösen a rejtett vér kimutatása, klinikai szempontból jelentős. A gyomortartalomban lévő vér többféle eredetű lehet, ezek között származhat a gasztrointesztinális szakaszon kivüleső sérülés következtében lenyelt vérből vagy gasztrointesztinális vérzésből. Egyes patológiás esetekben, például gyomorrák, gyomorfekély és gasztritisz esetén vér lehet a gyomorban. Alkohol és különböző gyógyszerek, például aszpirin vagy más fájdalomcsillapító szerek és kortikoszteroidok fogyasztása a gyomor nyálkahártyájának erózióját éB ennek folytán gyomorvérzést okozhat. Gyomor-nyálkahártya eróziót és ebből adódó vérzést jegyeztek fel olyan betegeknél, akiket súlyos sérülések vagy égés miatt vettek fel kórházba. Ez a fajta erózió az okozó sérülés bekövetkeztétől számítolt 24 órán belül jelentkezhet, és akut életveszélyt jelentő gyomorvérzést okozhat. A gasztrointesztinális szakaszban megjelenő rejtett vér ilyen korai kimutatásénak jelentősége, hogy a fenti esetekben olyan korai stádiumban segíti elő a diagnózis megállapítását, amikor a kezelés még igen hatásos. Ezért a találmány célja olyan tesztlemez biztosítása, amelyre nincs hatással a minták különbözősége, sem a minta pH-ja, és amelylyel székleten kívül más anyagból is kimutatható a vér. Célja továbbá a találmánynak, hogy a gyomornedvben lévő rejtett vér kimutatáséra gyors, könnyen kivitelezhető, mennyiségi vizsgálórendszert nyújtson, és ezzel a gasztrointesztinális állapot diagnózisát elősegítse. A találmány további célja olyan tesztlemez biztosítása, mely peroxidáz, vas, réz vagy vegyszerek, például cimetidin jelenlété-bői adódó téves pozitiv reakciók kiküszöbölésére képes. A gvajakollal impregnált papír vagy teaztlemez pH eltérésekkel és zavaró anyagokkal, például peroxidézzal szembeni stabilizálására korábban már történtek kísérletek. A 2 716 060 számú német közzétételi iratban arról számolnak be, hogy a gvajakolos papírba pufferoló vagy kelátképző anyagokat visznek a fenti problémák kiküszöbölésére. A pufferoló anyagokra azokban az esetekben van leginkább szükség, amikor a vizsgálandó közeg pH-ja jelentősen eltér az optimálistól, például gyomorfolyadékok esetén, vagy amikor kis katalizátormennyiséget, azaz hemoglobint kell kimutatni. Nem várt módon azt találtuk, hogy ha a pufferoló anyagot a kifejlesztő oldatba visszük be, nem pedig a gvajakolos papírt impregnáljuk vele - amint azt a korábbiakban végezték - a tesztlemezre nincs hatással a minta pH-jának változása és nem jelentkezik téves pozitív reakció peroxidázok, fémionok vagy cimetidin jelenlétében sem. A puffernek a papír impregnálása helyett a kifejlesztő oldathoz történő hozzáadása a kővetkező lényeges előnyökkel jár. A gvajakolos papírra vihető puffer mennyiséget 8 papir abszorbeáló képessége korlátozza. Ezért amennyiben nagymértékű pufferolásra van szükség hatásosabb, ha a kifejlesztő oldatot pufferoljuk. Nehéz lenne a puffer egyenletes eloszlatása a papíron. A kifejlesztő oldat pufferolásával nem korlátozzuk a pH-t a Bzubsztrátum pH-jéra, azaz a pH változtatható. Ha a papírt impregnáljuk, az impregnált papir pH-ja pontosan meghatározott és nem változtatható. Ha a papíron magas a aókoncentráció, az más reagenseket is befolyásol és a papír saját fizikai jellemzői is 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
