192775. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminociklitolok, aminociklitol-aminoglikozid antibiotikumok és származékaik elválasztására
6 192775 7 140-162 gentamicin C2-2t>, gentamicin Ci és gentamicin Cu 163-171 gentamicin Cl és gentamicin Cla 172-180 gentamicin Cia Látható, hogy megfelelően kiválasztott frakciók egyesítésével illetve elhagyásával a nyers gentamicin szulfát kiindulási komponensaránya megváltoztatható és a kívánt értékre beállítható. így pl. a 140-180. frakciókat egyesítve és az 1. példában leírt módon eljárva 54,0 g gentamicin C szulfátot kapunk, amelynek komponensaránya: gentamicin Ci 31.0% gentamicin C2-2b 40.9% gentamicin Cia 28.1% 3. példa 100 ml derített nyers sziszomicin koncentrátumot - amelyet a 179 145, a 179 146 és a 179 147 lajstromszámú magyar szabadalmak alapján állítottuk elő és amely 40 g sziszomicin szulfátnak megfelelő sziszomicin bázist és 3 g 4"-demetilsziszomicin bázist valamint 1,5 g 4"-epi-demetilsziszomicin bázist tartalmaz - 400 ml ammóniumciklusban lévő Amberlite CG-50 Type I. gyantán eresztünk át 1,5 ml/perc sebességgel. A megkötés után az oszlopot ugyanezzel a sebességgel 12 órán át mosatjuk ionmentes vízzel. A kromatografálást 10% metanolt tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldattal kezdjük el. A kromatografálás sebessége 1,5 ml/perc. 200 ml-es frakciókat szedünk, amelyek antibiotikum tartalmát papír- és vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük. A demetil-sziszomicin epimerek leoldása után a sziszomicint 10% metanolt tartalmazó 0,2 n ammónium-hidroxid oldattal oldjuk le. A megfelelő frakciókat egyesítve és az 1. példában leírt módon eljárva 2,5 g 4’-epidemetil-sziszomicin szulfátot, 4,3 g 4'-demetil-sziszomicin szulfátot és 32,0 g sziszomicin szulfátot kapunk. 4. példa Gentamicin C komplex sósavas hidrolíziséből nyert 9 g nyers 2-dezoxisztreptamin szulfátot 25 ml ionmentes vízben oldunk. Az oldat pH-ját 5 n ammónium-hidroxid oldattal 7,0-re állítjuk, majd az oldatot 1,5 g aktív szénnel derítjük, szűrjük. A derített oldat 2- -dezoxisztreptamin tartalmát '80 ml ammóníumciklusú Amberlite CG-50 gyantán kötjük meg. A megkötés lineáris sebessége 0,25 m/ó. A megkötés után az oszlopot ionmentes vízzel mosatjuk 10 órán keresztül 0,25 m/ó lineáris sebességgel. A kromatografálást 5% metanolt tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldattal végezzük. A kromatografálás sebessége megegyezik az előbbiekkel. 100 ml térfogatú frakciókat szedünk. Az anyagok elválását vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük (réteg: szilikagél, mozgó fázis: kloroform-metanol-cc. ammónium-hidroxid-viz 1:4:2:1 arányú elegye). A 2-dezoxisztreptamint tartalmazó frakciókat összeöntjük és bepároljuk. A 25 ml-re bepárolt oldatot 5 n kénsavval pH 4,5 értékig savanyítjuk és az oldatot 1 g aktív szénnel derítjük. A derített oldatból a 2- -dezoxisztreptamin-szulfátot metanollal csapjuk ki. 6,2 g 2-dezoxisztreptamin-szulfátot kapunk. 5. példa A 4. példában leírtakhoz hasonlóan 9 g nyers 2-dezoxisztreptamin-szulfátot kromatografálunk 80 ml ammóniumciklusú Amberlite CG-50 gyantán. Eluensként 8% etanolt tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldatot használunk. A 2-dezoxisztreptamint tartalmazó frakciókat egysítve és a 4. példában leírt módon eljárva 6,0 g 2-dezoxisztreptamin-szulfátot kapunk. 6. példa A 4. példában leírtakhoz hasonlóan 2- -dezoxisztreptamin-szulfátot állítunk elő oly módon, hogy eluensként 5% acetont tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldatot használunk. 5,8 g 2-dezoxisztreptamin-szulfátot kapunk. 7. példa A 4. példában leírtakhoz hasonlóan 2- -dezoxisztreptamin-szulfátot állítunk elő oly módon, hogy eluensként 5% metanolt és 5% acetont tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldatot hsználunk. 6,1 g 2-dezoxisztreptamin-szulfátot kapunk. 8. példa Sziszomicin alkilezéséból kapott 8 g reakcióterméket (amely vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján mintegy 25% netilmicin szulfátot és 40% el nem reagált sziszomicin szulfátot is tartalmaz) 200 ml ammóniumciklusú Amberlite CG-50 gyantán kromatografáljuk. A 8 g reakcióterméket 25 ml ionmentes vízben feloldjuk, és 1,5 ml/perc sebességgel megkötjük a gyantán. Megkötés után az oszlopot 8 órán keresztül ionmentes vízzel mosatjuk ugyanilyen sebességgel. A kromatografálás sebessége szintén 1,5 ml/perc, eluensként 10% metanolt tartalmazó 0,1 n ammónium-hidroxid oldatot alkal-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
