192741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új neplanocin antibiotikumok előállítására
3 192741 4 A találmány tárgya eljárás új neplanocin antibiotikumok előállítására. Az új antibiotikumok növények patogén mikroorganizmusai növekedését gátolják, valamint daganatellenes hatásuk van. Részletesebben kifejtve, a találmány tárgya olyan eljárás az új neplanocin antibiotikumok előállítására, amely magába foglalja a neplanocinokat termelő, Actinomycetales rendbe tartozó Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzs (deponálási száma PERM-P 4494) táptalajon tenyésztését és az új neplanocin antibiotikumok elkülönítését. Adenin-szerkezetű antibiotikumokat ismertet a 4 138 562 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A találmány szerinti neplanocin antibiotikumok szerkezete az (I) általános képlettel szemléltethető - ebben a képletben X hidroxil- vagy aminocsoport és Z (a) vagy (b) általános képletü csoport, és ezekben a csoportokban Y oxigénatom (-0-) vagy vegyértékkötés. A képletből egyértelmű sztereokémiái következtetéseket nem lehet levonni. A találmány szerinti új neplanocin antibiotikumok magukba foglalják az A-, C- és D-neplanocinokat és a B- és F-neplanocinokat. A neplanocin A gyengén bázisos anyag, és a kővetekező tulajdonságai vannak: (1) Elemi összetétel: talált: C=49,96%, H=5,00%, N=26,43%, számított: C=50,19%, H=4,97%, N=26,60%, (2) Molekulasúlya tömegspektrumelemzésből számítva: 263. (3) Molekulaképlete: C11H13N5O3. (4) Olvadáspontja: termikus elemzéssel meghatározva: 216 °C. (5) Fajlagos forgatóképessége: (ccJd2^ =-157 °C (c=0,45%, vízben). (6) Ultraibolya abszorpciós spektrum (14 •ÿ/ml), vízben: lásd az 1, ábrát: Xux=263 mn, Eic«lx=602,l; 3 pH-nál: Xmx=261 ftiu, Eica1*=566,4 (hidrokloridként); 10 pH-nál: Xaax=263 mp, Eie»lx=595,0. (7) Infravörös abszorpciós spektrum (Kbr): lásd a 2. ábrát. Abszorpciós sávok 3360, 3200, 2920, 1640, 1600, 1570, 1480, 1415, 1370, 1330, 1300, 1250, 1205, 1160, 1115, 1080, 1050, 1005, 910, 850, 790, 730 cm_1-nél. (8) Magmágneses rezonancia spektrum: lásd a 3. ábrát (DSS belső standard, deutérium-dimtetilszulfoxidban, 100 MHz). (9) Oldhatóság: Oldható: vízben,' dimetilszulfoxidban, dimetilformamidban, ecetsavban és vizes acetonban. Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban, hexánban. (10) Színreakció: Pozitív: káliumpermanganát elszintelenltés, perjodát oxidálás és ánizsaldehid. Negatív: vas(III)-klorid, ninhidrin, anilinftalát, Molisch- és Fehling-próba. (11) Kémhatás: gyengén bázisos. (12) Színe: fehér tűkristályok. (13) Rf-értéke kovasavgélen (Tokyo Kaséi Co., f-kovasav gél): 6:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-víz: Rf=0,36; 10 : 0,5 : 2 arányú n-butanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,27; 10 : 1 : 1 arányú n-propanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,41; 10 : 1 arányú aceton-viz: Rf=0,34; 10 : 2 : 1 arányú etilacetét-metanol-víz: Rf=0,21; 10 : 2 : 1 arányú kloroform-metanol-ecetsav: Rf=0,17. (14) Szerkezeti képlete: lásd az (IA) általános képletet. A neplanocin A biológiai tulajdonságai a következők: (1) Növények patogén gombáinak növekedését gátló hatása: A neplanocin a 100 u/ml koncentrációjú oldata agar lemezen a Helminthosporium oryase M 0306 tenyészeten 18,9 mm átmérőjű gátlási zónát mutat. (2) Daganatellenes hatás: Murine leukémia L-1210 daganat 106 sejtjét intraperltoneálisan egerekbe oltottuk be, és a beoltás után egy nappal 5 napon át, naponta egyszer intraperitoneálisan csoportonként 0,16 mg/kg, 0,32 mg/kg, 0,63 mg/kg, 1,25 mg/kg, 2,5 mg/kg, illetve 5,0 mg/kg neplanocin A-t adtunk, be. Kontrollcsoportként 10 egeret használtunk, és minden egyes kezelt csoportban 7 egér volt. Az eredményeket a 4. ábrán szemléltetjük. A megfigyelés 15. napján a kontrollcsoportnál megfigyelt, átlagos túlélési időtartam 7,4 nap volt. A kontrollcsoporttal összehasonlítva a kezelt csoportoknál az élettartam meghosszabbodását figyeltük meg; azaz a 0,16 mg/kg adaggal kezelt csoportnál 158%; a 0,32 mg/kg adaggal kezelt csoportnál 170%-os volt az élettartam meghosszabbodása; a 2,5 mg/kg-os adaggal és az 5,0 mg/kg-os adaggal kezelt csoportokban halálozást nem tapasztaltunk. Az L-1210 daganatsejtekhez hasonlóan az Ehrlich ascites daganatsejtekkel, a Sarcoma-180, a P-388 leukémia sejtekkel beoltott egereknek és a Yeshida szarkóma sejtekkel beoltott patkányoknak a neplanocin A beadása után az élettartamuk meghosszabbodását figyeltük meg. (3) Heveny toxicités: LD50 (50% halálozást okozó adag): 137,3 mg/kg egereknek (intraperitoneálisan beadva). Halálozást nem figyeltünk meg akkor, ha 14 napon át intraperitoneálisan 5 mg/kg/nap mennyiséget adtunk be. Irányelvek és adagolás: A heveny leukémia kezelésére a gyógyszert fiziológiás nátriumklorid-oldatban old-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
