192513. lajstromszámú szabadalom • Vércsoport-meghatározó gyorsdiagnosztikum
1 2 A találmány tárgya vércsoport-meghatározó gyorsdiagnosztikum és eljárás ennek előállítására. A vércsoport-meghatározás az egészségügyi ellátás rutin, de nem egyszerű feladatai közé tartozik, melyet szigorú előirjások szabályoznak. Vannak olyan körülmények (katasztrófa-helyzetek, háborúk, stb.) amikor nagyszámú vércsoport-meghatározásra ] van szükség, a kellő laboratóriumi háttér {sléril felszerelés, eszközök, gépek, stb.) megléte nélkül. Az ilyen esetekre, valamint a betegágy melletti, szűrővizsgálat jellegű áyors vércsoport-meghatározásra több országban dolgoztak ki gyorsdiagnosztikumokat, ' melyeknek közös elve, hogy_ a meghatározó savókat speciális, impregnálószerekkel átitatott papírhordozóra szárítják- Ilyenek például a Nordiisk Insulinlaboratórium (Dánia) által forgalombahozott „ABO-D Kit” és ,,E1- doncard CDE”, a Biotest Diagnostics (NSzK) által forgalombahozott „Serafol” és a Germed, Berlin (NDK) által f Olgalombahozo11 „Bed-side ABO” szárazreagensek. Ezek a szárazreagensek egyszerűen és!gyorsan alkalmazhatók, hátrányuk azonban, hogy csak egyszerű vércsoport-meghatározára alkalma sak. Kidolgoztunk egy olyan új gyorsdiagnosztikumot, amelynek alkalmazása egyszerű és megbízható, és amely viszonylag hosszú ideig tárolható. A találmány tárgya tehát vércsoport-meghatározó gyorsdiagnosztikum, amely eloxált alumíniumlemezen kialakított mélyedésekben rögzített anti-A, ant-i-B, anti-AB és adott esetben anti-D, anti-C és anti-E reagensekből áll. A találmány tárgya továbbá eljárás a fenti gyorsdiagnosztikum előállítására oly módon, hogy eloxált alumíniumlemez mélyedéseibe anti-A, ant-i-B, anti-AB és adott, esetben anti-D, anti-C anti-E reagenseket cseppentünk, és a reagenseket kétlépcsős vákuumszárítással rögzítjük az alumíniumlemezen. A találmány szerinti gyorsdiagnosztikum hordozóanyagként alumíniumlemezt használunk, melynek vastagsága célszerűen 0,25—0,5 mm. A lemezen préseléssel 10—30 mm átmérőjű és 0,3—0,6 mm mély.bemélyedéseket alakítunk ki. A kialakítandó bemélyedések száma attól függ, hányféle reagenst kívánunk felvinni a hordozóra, továbbá még egy bemélyedés kell a vizsgálandó vérminta számára. A préselt és megfelelő méretűre leszabott hordozólemezt kálium-hidroxid fürdőben, azt követő bő meleg és hidegvizes, majd alkoholos öblítéssel felületkezeljük (eloxáljuk). A találmány szerinti gyorsdiagnosztikumhoz fővércsoportbeli — anti-A, anti-B, anti- AB —, továbbá adott esetben Rh-rendszerbeli — anti-D, anti-C, anti-E, stb. — reagenseket alkalmazunk. A fővércsoportbeli reagenseket úgy készítjük, hogy igen jó aviditású (2—5 másodpercen belül kezdődő, 3 percen belül négy keresztes agglutináoiót adó) A (anti-B), B (anti-A) és 0 (anti-AB) vérek savóját, illetve fibrinogénmentesített plazmáját aszeptikus körülmények között vércsoportonként összekeverjük, hőkezeléssel inaktiváljuk, tartósítjuk, adjuváljufc, majd sterilre szűrjük. Az inaktiválást 50 —60 °C-on mintegy 30 percig tartó hőkezeléssel végezzük. A hőkezelt reagenseket tartósítjuk például nátrium^aziddal, és adjuválószerként liofilizálási segédanyagot, például szacharózt, mintegy 3°n mennyiségben adunk hozzá. Az Rh-rendszerbeli reagenseket anti-D. anti-C, anti-E, stb. tartalmú vérek savójából, illetve plazmájából a fővércsoportbeli reagensekhez hasonlóan készítjük, de agglutinációt elősegítő, adjuválószereket, például ficollt, glicint, metil-cellulózt is adunk a reagensekhez. Az előkészített lemezekre aszeptikus körülmények között 0,03 — 0,05 ml-es cseppeket viszünk fel a reagensekből. Az Rhrendszerbeli reagensek mellé az enzimtechnikával történő meghatározáshoz 0,03 — 0,05 ml, cisztinnel és risztemnél aktivált l°o-os papainoldatot is cseppentünk, és a reagenseket kétlépcsős vákuumszárítással a hordozóra szárítjuk. A vákuumszárítást liofilizálógépben vagy vákuumszárítóban végezzük. Első lépésben 10 000 — 40 000 Pa, előnyösen 25 000 Pa nyomáson és 15—25 °C-on. előnyösen 20 °C-on, a második lépésben 70 Pa alatti, előnyösen 10 és 5 Pa közötti nyomáson 3*0 és 50 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 40 °C-on dolgozunk. A szárítás teljes időtartama mintegy 3 — 5 óra. Használatbavételkor a reagenseket 1 — 1 csepp csapvízzel feloldjuk, és a vizsgálandó vérmintát a kijelölt mélyedésbe cseppentjük. A meghatározást közvetlenül újjbegvből vett vérből, alvadt vérből vagy alvadásgátlót tartalmazó vérmintából is végezhetjük. A vizsgálandó vérmintát alkalmas eszközzel — célszerűen a diagnosztikummal együtt esv csomagban elhelyezett polisztirol pálcikák segítségével — érintkezésbe hozzuk a reagensekkel. A lemezt néhányszori döntögetés után vízszintes felületre helyezzük, és 3 perc elteltével leolvassuk. A találmány szerinti gyorsdiagnosztikum előnyei a következők: a hordozóanyag eloxált alumíniumlemez, ez mindenféle impregnálást, speciális fedést, szigetelőréteget feleslegessé tesz. A kialakított mélyedések mind a reagensek felvitelét, mind a vércsoportmeghatározást megkönnyítik. Az alumíniumlemez felületére a reagensek stabilan tapadnak, felhasználáskor a reagensek csapvízzel feloldhatók, és az oldódás azonnal bekövetkezik. Az alumíniumlemezen a reakció rendkívül jól érzékelhető. A találmány szerinti (gyorsdiagnosztikum anti-AB reagenst is tartalmaz, így a tévesztési lehetőségek csökkennek, a vércsoport-meghatározás biztonságosan végezhető el. Az így végzett meghatározás a laboratóriumi körülménvek között végzett meghatározással egyenértékű. 12 513 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
