192513. lajstromszámú szabadalom • Vércsoport-meghatározó gyorsdiagnosztikum
1 192 513 2 Az alumíniumlemez jó hőátadóképessége következtében a reagensek nedvességtartalma a vákuumszárítással minimálisra csökkenthető, így a diagnosztikum viszonylag hoszszú ideig (2 — 5 év) minőségváltozás nélkül, akár szobahőmérsékleten is tárolható. A találmány szerinti készítmény előállítását a következő példával szemléltetjük. Példa Fővércsoportbeli reagensek készítése Legalább 1:64 anti-A, anti-B titerű illetve legalább 1:32 anti-AB titerű, jó aviditású (2 — 5 másodpercre kezdődő, 3 percen belül négykeresztes agglutinációt adó) vérek savóját aszeptikus körülmények között vércsoportonként összekeverjük 0,1% nátriumaziddal tartósítjuk, 3% szacharózt adunk hozzá, és 56 °(j!-on 30 percig, tartó hőkezeléssel inaktiváljuk, utána derítő és csíramentesítő szűrőn szűrjük. - " Legalább 1:128 anti-A, anti-B titerű, illetve legalább 1:64 anti-AB titerű, jó aviditású vérek plazmáját, aszeptikus körülmények között vércsoportonként összekeverjük, 0,1% nátrium-aziddal tartósítjuk, kalcium-levulináttal vagy ka 1 ci u m-k 1 or i d - di h i d rá t ta l fibrinogénmentésítjuTc* majd ugyanúgy kezeljük, mint a savókat,'*; j «. t i Rh-rendszerbeli reagensek készítése Legalább 1:128 anti-D, anti-C, anti-E, stb. titerű vérek savóját 0,1% nátrium-aziddal tartósítjuk, aszeptikus körülmények között vércsoportonként összekeverjük, 56 °C-on 60 percig inaktiváljuk, az irregularis agelutinineket abszorpcióval eltávolítjuk, maid 3° n szacharózt, 2% glicint, továbbá az agglutináció elősegítésére 0,3—0,5% Ficoll és 0,01— 0,02° o metil-cellulóz adunk hozzá, és csíramentesre szűrjük. A plazmákat szintén 0,1% nátrium-aziddal tartósítjuk, kalcium-klorid-dihidráttal vagy trombinos; kezeléssel fibrinogénmentesítjük, majd ugyanúgy kezeljük, mint a savókat. Megfelelő annak a reagensnek az aviditása, melynél a reakció 1 percre kezdődik és 3 percre maximumra fokozódik. Az inkomplett haemagglutininek kimutatásához szükséges még L-cisztinnel és L-cisztein-hidrokloríddal aktivált 1%-os 1/15 mol l-es foszfátpufferben oldott papain, amely 0,0125% metil-cellulózt tartalmaz. A hordozó előkészítése 0,25—0,5 mm vastag alumíniumlemezen — anti-A, anti-B, anti-AB és anti-D reagensek használata esetén — préseléssel öt mélyedést alakítunk ki. A mélyedések 0,3 — 0,6 mm mélyek. Négy mélyedés átmérője 15 mm, az ötödiké nagyobb, például 30 mm. A préselt, majd megfelelő méretűre leszabott lemezeket 3 percig 90 °C-os 20%-os kálium-hidroxid-fürdőben tartjuk, majd bő meleg, utána pedig hideg vízzel, és végül 5 alkohollal leöblítjük. A diagnosztikum készítése Az előkészített, felületkezelt lemezek kisebb mélyedései közül háromba sorra 0,03 ml 10 anti-A, anti-B és anti-AB reagenst cseppentünk, a negyedik kisebb mélyedés a vérminta számára üresen marad. A nagyobb mélyedésbe 0,03 ml anti-D reagenst, és tőle kicsit távolabb 0,05 ml aktív papain oldatot 15 cseppentünk. (Az Rh-rendszerbeli reagenst külön lemezre is fclvihetjük. Ezután a lemezeket liofilizálógépbe helyezzük, és megkezdjük a kétlépcsős vákuumszárítást. Első lépésben kis vákuumot (kö- 20 rülbelül 25 000 Pa) és alacsony hőmérsékletet (+20 °C), a második lépésben nagy vákuumot (10 — 5 Pa) és megemelt hőmérsékletet (+40 °C) alkalmazunk. Ezzel a módszerrel az anyag fagyasztás nélkül is vi- 25 szonylag alacsony hőmérsékleten szárad, így elkerülhető a fagyasztással járó fehérjestruktúna-változás, illetve az ezzel járó aktivitás csökkenés. A kész diagnosztikumot polisztirol pálci- 2Q kákkal együtt alufólia tasakban csomagoljuk, és légmentesen lezárjuk. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 35 1. Vércsoport-meghatározó gyorsdiagnosztikum, azzal jellemezve, hogy eloxált alumíniumlemezen kialakított mélyedésekben rögzített anti-A, anti-B, anti-AB és adott esetben anti-D, anti-C és anti-E reagensek- 40 bői áll. 2. Eljárás vércsoport-meghatározó gyorscliagnosztikum, előállítására, azzal jellemezve, hogy eloxált alumíniumlemez mélyedéseibe anti-A, anti-B, anti-AB és adott esetben anti-D, anti-C, anti-E reagenseket cseppentünk, és a reagenseiket kétlépcsős vákuumszárítással rögzítjük az alumíniumlemezen. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vákuumszárítás első 5^ limesében 10 000 — 40 000 Pa nyomáson és 15 — 25 °C hőmérsékleten, a második lépésben 70 Pa alatti nyomáson és 30 — 50 °C hőmérsékleten végezzük a szárítást. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal 55 jellemezve, hogy reagensként anti-A anti-B, anti-AB, anti-D, anti-C, anti-E tartalmú vérek sa/vójából, illetve fibrinogénmentesített plazmájából a vércsoportonként összekevert savók, illetve fibrinogénmentes p’azmák tartósításával inaktiválásával adjuválószerek adagolásával, majd sterilre szűrésével készült reagenst használunk. Rajz nélkül 3
