192206. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptidek előállítására
1 192 206 2 IV. Az aminosavcsoportok jelölésére a következő rövidítéseket használjuk: Lys = lizil Arg = arginil Pro = prolii Cys = ciszteinil Asn = aszparaginil Cyt = cisztinil Leu = leucil 1. példa a) Boc—Asn—Cys(Trt) —Pro — —Arg (Mbs) —OtBu előállítása 3.00 g, 3,56 mmól H—Cys(Trt)—Pro— —Arg(Mbs)—OtBu-t és 0,83 g, 3,56 mmól Boc—Asn—OH-t 30 ml DMF-ban oldunk és az oldatot -20 °C hőmérsékletre hűtjük. Ezen a hőmérsékleten 0,58 g, 4,27 mmól HOBt-t és 0,81 g, 3,92 mmól DCC-t adunk az elegybe és 1 órán át keverjük. Ezután az elegyet 0 °C-on még egy órán át és szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük, majd a képződött DCU-t kiszűrjük. A szűrletet bepároljuk és a visszamaradó anyagot 100 ml 3 : 2 arányú metilén-klorid : 2-butanol elegyben oldjuk. Ezután az oldatot egymást követően háromszor 30 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, háromszor 30 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfátoldattal, majd háromszor 30 ml 30%-os nátriumklorid-oldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd éter hozzáadásával kicsapjuk belőle a peptidet. Ily módon 3,25 g terméket nyerünk. Rf = 0,22 (toluol : etanol 8 : 2 arányú elegyben), [a]“ = —1,9° (c = 1, DMF). b) Boc—Asn—Cys(Scm)—Pro—Arg(Mbs) — —OtBu előállítása 3.00 g (2,84 mmól) az a) lépés szerint előállított Boc—Asn—Cys(T rt)—Pro—Arg(Mbs)—Ot-Bu-t 10 ml metanol és 50 ml metilén-klorid elegyében oldunk. Az oldathoz keverés mellett 0,4 ml Scm-kloridot adunk, majd 5 perc múlva az anyagot éterrel kicsapjuk. A csapadékot kiszűrjük, éterrel mossuk, majd szárítjuk. Ily módon 2,56 g terméket nyerünk. Rf=0,17 (toluol : etanol 8 :2 arányú elegyében), [a]£ = -66,9° (c = 1, DMF). H—Cys—OH c) Boc—Asn—Cys—Pro—Arg(Mbs) — —OtBu.HCl előállítása 2,4 g (1,47 mmól), a b) lépés szerint előállított peptidet 200 ml etanolban oldunk, majd az oldatot nítrogénatmoszférában, keverés mellett 10 ml metanolban oldott 650 mg (3,71 mmól) H—Cys— —OH • HC1 ■ H20-t tartalmazó lombikba visszük. Az elegyet további 40 percig keverjük, bepároljuk, majd a peptidet éterrel kicsapjuk belőle. A csapadékot kiszűrjük és szárítjuk. Ily módon 2,48 g terméket nyerünk. A kapott peptidet 2-butanol : metilén-klorid 2 : 3 arányú elegyében oldjuk, majd az oldatot vízzel extraháljuk. A szerves fázisból a peptidet kicsapjuk, majd kiszűrjük és szárítjuk. Ily módon 850 mg terméket kapunk. Rf = 0,52 (metilén-klorid : metanol : víz 70 : 30 : 5 arányú elegyében). H—Cys—OH d) H—Asn—Cys—Pro—Arg—OH acetátsó előállítása 850 mg (0,88 mmól) a c) lépés szerint előállított peptidet 15 ml TFA, 2,2 ml (35,2 mmól) MSA és 0,2 ml tio-anizol elegyében oldunk, és az oldatot 5 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután éterbe öntjük, a kiváló csapadékot kiszűijük és éterrel mossuk. A csapadékot ezután terc-butanol : víz 1 : 1 arányú elegyében oldjuk, majd acetát formájú ioncserélőt (Dowex 2x8) adunk az oldathoz, és az elegyet 1 órán át keverjük, majd szüljük. A kapott szűrletet fagyasztva-szárítjuk. A kapott anyagot szilikagél oszlopon tisztítjuk, butanol : ecetsav : víz 2:1:1 arányú elegyét alkalmazva eluensként. Ily módon 315 mg terméket nyerünk. [a]“ = - 136,3° (c = 0,25, 10% HOAc). 2. példa a) Boc —Asn —Cys( Trt) —Pro —Leu —OtBu előállítása 2.50 g (2,86 mmól) Trt—Cys(Trt)—Pro— — Leu—OtBu-t 25 ml ecetsavban oldunk, majd 2,5 ml vizet adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át keverjük, majd 10 ml vizet adunk hozzá, és a képződött csapadékot kiszűrjük. A szűrletet bepároljuk, a visszamaradó anyagot etil-acetátban oldjuk, majd az oldatot háromszor 50 ml 5%-os nátriumhidrogén-karbonát-oldattal, és háromszor telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. A szerves fázist szárítjuk, majd bepároljuk. A visszamaradó anyagot 25 ml DMF-ban oldjuk, majd 655 mg (2,86 mmól) Boc—Asn—OH-t adunk hozzá. Az elegyet- 15 °C hőmérsékletre hűtjük, majd egymás után 464 mg (3,43 mmól) HOBt-t és 651 mg (3,15 mmól) DCC-t adunk hozzá. Az elegyet még egy ideig keverjük, majd —25 °C-ra hűtjük. Ezután a DCU-t kiszűrjük, majd a szűrletet bepároljuk. A visszamaradó anyagot 50 ml etil-acetátban oldjuk, majd az oldatot háromszor 25 ml 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, háromszor 25 ml 5%-os káliumhidrogén-szulfát-oldattal, majd háromszor 25 ml telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd bepároljuk. A visszamaradó anyagot éterben oldjuk, és a peptidet kikristályosítjuk. A kristályokat kiszűrjük és szárítjuk. Ily módon 1,64 g anyagot nyerünk, a kapott termék olvadáspontja 177_17R v [ajo = -18,l°(c= 1, DMF) b) Boc —Asn —Cys(Sem) —Pro —Leu —OtBu előállítása 1.50 g (1,78 mmól) az a) lépés szerint előállított peptidet 10 ml metilén-kloridban oldunk, majd 0,3 ml Scm-kloridot adunk hozzá. Az elegyet 5 percig keverjük, majd a képződött csapadékot kiszűrjük belőle. A csapadékot éterrel mossuk és szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
