192107. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enkefolináz-gátló hatású szubsztituált depeptidek előállítására
1 192.107 2 6. N-(D-l-karboxi-3-fenil-propil)-L-(4 fluor-fenil)alanil-L-alanin, op. 147—I52ÖC, 7. N-(D,L-l-karboxi-3-fenil-propil)-L-fenil-alanilglicin, op. 140—145°C. 8. példa N-(L-l-metoxi-karbonü-2-fenil-etil)-L-fenil-alanin 15 g (0,07 mól) fenil-alanin-me til-ész ter hidrokloridot 400 ml metanolban oldunk. 2,4 g (0,105 mól) feni!-pirosszőlősav-nátriumsót, majd 15 g 3A molekulaszitát (Aldrich Chemical) adunk ezután hozzá. A szuszpenziót szobahőmérsékleten keverjük, miközben 6,6 g (0,105 mól) nátrium-dano-bórhidrid és 75 ml metanol elegyét 6 óra alatt hozzáadagoljuk. A szuszpenziót ezután két napig keverjük, majd szűrjük és aszürletet sziruppá bepároljuk. A sziruphoz 3 óra alatt 300 ml 2,5%-os sósavat adunk és a kapott fehér kristályokat szűrjük és csökkentett nyomáson súlyállandóságig szárítjuk. A száraz termék reprezentatív mintáját kovasavgél lemezen, kloroform :metanol:tömény sósav 50:15:1 térfogatarányú elegyében vékonyrétegkromatográfrásan vizsgáljuk a diasztereoizomerek megközelítő aranyának meglratározására. A kromatogram szerint a cím szerinti diasztereoizomerek megközelítő aránya 5050 és kevés 3-fenil-2-hidroxi-propionsav van még az elegyben. Hozam: 24 g, olvadáspontra 119—130 °C. Az NMR spektrum összhangban van a kívánt termék szerkezetével. 400 ml etanolból átkristályosítva a terméket 14,7 g cím szerinti kívánt vegyületet kapunk (ismét diasztereoizomer elegy formájában), amely a gyorsabban mozgó izomerben gazdagabb (vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint). Olvadáspontja 135-150 C. Ennek a dúsított diasztereomer elegynek 200 mgját 3 ml metanolból átkristályositva 100 mg kristályos anyagot kapunk, amely már csaknem tiszta gyorsabban mozgó izomert tartalmaz (a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint). Olvadáspontja 169—172 C 14,5 g dúsított diasztereomer elegyet 400 ml metanolból kristályosítunk, azonban kristálykiválás nem történik. Az oldatot bepároljuk 200 mi re és beoltjuk és állni hagyjuk Kocsonyás csapadék képződik, amely a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint a lassabban mozgó izomerben dúsabb izomerelegy. Hozam 7,0 g. Ebből a termékből 3 g-t nagynyomású folyadékkromatográfiás úton Waters Prep. 500 készüléken, két sorbakapcsolt kovasavgél œzlopon és oldószerrendszerként kloroform metanol :ammónium-hidroxid 500:150:10 térfogatarányú elegyét használva 0,2 liter/ perc átfolyási sebességgel kromatografálunk. A 8. és 9 frak dók 450 mg 1 izomert tartalmaznak. A10. frakdóból kapott 400 mg anyagot metanolból átkristályosítva 150 mg 1 izomer különül el. A 12-15. frakciók 1,2 g tiszta II izomert tartalmaznak. All. frakcióból az I és 11 izomer elegyét nyerhetjük ki. A nagy nyomású folyadékkromatográfiás elválasztást az előző bekezdésben leírtaknak megfelelően ugyanazon anyag újabb 3,5 gjával megismételjük, ugyanolyan oldószerelegyet és adszorbenst alkalmazva. A 4. frakd óból 400 mg tiszta I izomert kapunk, az 5. frakció 1,0 g anyagot tartalmaz, amelyet metanolból átkristályosítunk és 550 mg lényegében tiszta I izomert kapunk, a 6. frakdóból az I és II izomer elegyét tartalmazó 0,4 g anyag különíthető el, a 7-10. frakciókból 1,6 g tiszta II izomert kapunk. I izomer: Olvadás pontja: 171-173°C Tömegspektrum: M+l 328, 282 (M — COOH) 268 (M-COOCH3) 236 (M-91) Szerkezetét a (SLVI) képlet mutatja. II izomer: Tömegsprektrum:M+l 328 282 (M-COOH) 268 (M-COOCH3) A kocsonyás csapadék kiszűrésekor kapott szürletet 50 ml-re bepároljuk és 100 ml acetonitrilt adunk hozzá hűtés közben és 1 P g fehér kristályos anyag válik ki. Olvadáspontja 167—170°C. Ezeket a kristályokat metanolból átkristályosítjuk, így 0,7 g fehér-kristályos anyagot kapunk, amely 171 -173°C-on olvad. N-(L-1 -kar boxi-2-fenil-etil)-L-fenil-alanil -bé ta-alanin - me til-ész ter 1/0 g (3,05 mmól) I izomert 20 ml dimetil-formamidban oldunk, m$d 520 mg (3,4 mmól) 1-hidioxihenztriazol-hidrátot, 472 mg (3,4 mmól) béta-alaninmetil-észter-hidrokloridot, 1,3 ml (ekvivalens) N-etilmorfolint és 649 mg (3,4 mmól) N-(3-dimetil-aminopropil)-N-etil-karbodümid-hidrokloridot adunk. A kapott oldatot szobahőmérsékleten 48 óra hosszat keveijük és azután 150 ml jeges vízbe öntjük keverés közben, majd a vizes oldatot 2.150 ml etil-éterrel ext- i aháljuk. Az etil-éteres réteget 3.100 ml vízzel, majd néhány csepp sósavat tartalmazó vízzel, végül vízzel mossuk. Az éteres réteget vízmentes magnézium-karbonáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. így 1,1 g dm szerinti vegyületet kapunk gumiszerű anyag alakjában. NfL-l-karboxi-2-fenil-eti])-L-fenil-alanil-bé ta-alanin Az előző reakcióban kapott gumiszerű anyagot 20 ml metanolban oldjuk és 10 perc alatt keverés és külső hűtés közben 6,6 ml n nátrium-hidroxid oldatot cseoegtetünk hozzá. Az oldatot éjszakán át (15—20 óra) szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 5%-os sósavoldattal keverés közben az oldat pH-ját 2,5-re állítjuk miközben lassan fehér szilárd anyag válik ki. Az oldatot szűrjük és a csapadékot csökkentett nyomáson, 40°C-on súlyállandóságig szárítjuk. Hozam: 900 mg. Olvadáspontja: 218—219°C. Tömegsprektum M/e 385 (M+l) 367(M+l —18) 340 (M+1 -COOH) 339 (M—45 -COOH) 293 (M-91) 9-15. példa A 8. példában leírt eljárást követve és a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazva a következő vegyületeketés diasztereomer elegyet állítjuk elő: 9. N-(L-l-karboxí-3-fenil-propil)-D,L-3-(l-naftil)alanil-L-alanin, op. 186—1946C, 10. N-(L-l-karboxi-3-fenil-propil)-L-3-( 1 -naftil)-alanil-bé ta-alanin. 11. N-(L-1 -karboxi-2-metil-propil)-D,L-fenil-alanÜL-alanin, op. 1Ó0-172C. 12. N-(H -karboxi- 2-be nziltio-etil)-L-fenil-alanilbéta-alanin, op. 152-154°C. 13. N-(L-l-kaiboxí-3-feml-propíl)-L-fenil-aíanil-L-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
