191961. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,5 és 8 helyzetben szubsztituált angiotenzin-II antagonista hatású peptidek előállítására

9

191961

10

2. példa

H-His (Dnp)-Pro-Lac-OBzl. HCl

7,3 g (30 mmól) tejsav cinksót 40 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk, 4,2 ml (30 mmól) trietil-amint és 9,36 g (30 mmól) Boc-Pro-OSu-t adunk hozzá. 24 órás, szobahőmérsékleten történő keverés után az oldat kitisztul. Ezután a dimetil-formamidot csőkkentett nyomáson eltávolítjuk, a maradékot 150 ml etil-acetátban oldjuk, majd 1 mól/1 koncentrációjú sósav-oldattal és vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajszerű Boc-Pro-Lac-OH-t 50 ml hexánnal megszi- ^ lárditjuk, szűrjük. Atkristályosítás 40 ml 1 : 1 arányú éter-hexán elegyböl. Termelés:

6,6 g (77%). Op.: 108-110 °C, [cc]D24 = -88,2°

(c = 2, etanolban); Rt5 = 0,30.

2,87 g (10 mmól) Így kapott Boc-Pro-Lac-OH- 20 -t 20 ml etil-acetátban oldunk, 1,7 ml (12 mmól) trietil-amint, majd 1,42 ml (12 mmól) benzil-bromidot adunk hozzá. Az oldatot 8 órán át forraljuk visszafolyatás közben, majd 20 ml etil-acetáttal hígítjuk, vízzel, 1 mól/1 25 koncentrációjú sósav-oldattal és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a Boc-Pro-Lac-OBzl-t olaj formájában nyerjük. Súlya: 3,05 g (81%); Rf1 = 0,67. [oc]d24 = -90,0° (c = 2, etanolban).

2,65 g (7,0 mmól) Így kapott Boc-Pro-Lac-OBzl-t 10 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldunk, 15 perc múlva az oldatot száraz éterrel hígítjuk, majd bepároljuk. Az így nyert H-Pro-Lac-OBzl-hidrokloridot (Rf4 = 0,2) 15 ml

dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk

3,5 g (6 mmól) Boc-His(Dnp)-OPfp-t. 1 órai keverés után a dimetil-formamidot lepároljuk, a maradékot 60 ml etil-acetátban oldjuk és 1 mól/1 koncentrációjú sósav-oldattal, vízzel és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos maradékot 15 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk és 15 perc múlva száraz éterrel a szabad tripeptid-hidrokloridot (Rf3 = 0,1) kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk. Termelés: 2,8 g (78%). A peptidlánc további felépítése az 1. példában megadott módon történik. A hasonló módon előállított védett AU-analógokat a 2. táblázat tartalmazza.

2. téalázat

A védett oktapeptidek fizikai állandói

Peptid

Termelés

%

Op.

°C

Rf3

[*]d24

c = 1, DMF

Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Chg-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB

58*

213 (b)

0,8

Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)"Cpg-His(Dnp)-Pro-Ala-Orçp

50*

178-181

0,77-21,4

Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Chg-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl

54*”

217 (b)

0,63-35,9

Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Cpg-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl

61*”

192-199

0,60-32,7

Z-0Ala-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Cpg-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl

58*”

180-184

0,76-44,3

Z-OGly-Arg(NOz)-Val-Tyr(Bzl)-Chg-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl

61"

180-183

0,65-26,6

* A kitermelés BOC-Pro-OPfp-re számítva;

** A kitermelés BOC-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzl-re számítva

3. példa

A védócsoportok eltávolítása

1,5 g (1 mmól) Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr-(Bzl)-Chg-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB-t 5 ml dimetilformamidban oldunk, hozzáadunk 1,9 ml (25 mmól) 2-merkaptoetanolt, majd 1 órai keverés után az anyagot száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük, etanollal mossuk. így 1,23 g (91%) Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Chg-His-53-Pro-Ala-ONB védett oktapeptidet nyerünk. Rf2 = 0,20; Rf3 = 0,40. Az anyagot 15 ml 5 : : 1 : 1 térfogatarányú metanol-ecetsav-viz elegyben oldjuk, hozzáadunk 0,6 g 10%-os 55 csontszenes palládiumot és 24 órán át keverés közben hidrogén gázt buborékoltatunk ét rajta. A reakció végét vékonyréteg kromatográfiával ellenőrizzük. Ekkor a katalizátort kiszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. A 60 maradékhoz 9 : 1 térfogatarányú etanol-vlz-elegyet adunk, majd újra bepároljuk és a maradékot etanollal megszilárdítjuk, szűrjük, etanollal mossuk. így 0,7 g (74%) Sár1, Chg5, Ala^AII-t kapunk, melyet a fentiekben 65 megadott módon tisztítunk.

6