191961. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,5 és 8 helyzetben szubsztituált angiotenzin-II antagonista hatású peptidek előállítására
7 191961 8 peptidet 4 ml 0,01 mól/1 koncentrációjú ammónium-acetát-oldatban oldunk, majd az oldatot 0,5 ml karboxi-metil-ceilulóz (CMC 52) oszlopra rétegezzük, amelyet előzőleg a fenti pufferrel egyensúlyba hoztunk. Gradiens keverővel 0,01 mól/1 koncentrációjú és 0,5 mól/1 koncentrációjú ammónium-acetát-oldatokat elegyítve gradiens elúciót végzünk. Ennek időtartama 4 nap, az áramlási sebesség 25 ml/h. Az oszlopról lejövő eluátumot LKB Uvicord-II segítségével folyamatosan regisztráljuk, majd a kapott görbe alapján a fő frakciót liofilezzük. A szintézishez felhasznált Boc-Chg-OPfp és Boc-Cpg-OPfp új vegyületek. Op.: 91-94 °C, Md24 = -20.2° (c = 0,5, etil-acetát, illetve Op.: 98-99 °C, [cc]d24 = = -31,8° (c - 0,5, etil-acetát). 1. példa Z-Sar-A rg,(NOz ) - Val- Tyr(Bzl)-Cgh --HisiDnp)-Pro-Ala-ONB 2.0 g (8 mmól) Ala-ONB.HCl-t 30 ml kloroformban oldunk, hozzáadunk 1,12 ml trietil-amint és 1,52 g (4 mmól) Boc-Pro-OPfp-t. 30 perces szobahőmérsékleten történő keverés után az oldatot vízzel és 10%-os citromsav-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett dipeptidet (Rf1 = 0,7) izolálás nélkül 8 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk, 15 perc múlva az oldatot száraz éterrel hígítjuk és bepároljuk. A szabad dipeptid-hidrokloridot (Rf4 = 0,65) 20 ml dimetil-formamidban oldjuk, trietil-arainnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 3,52 g (6 mmól) Boc-His(Dnp)-OPfp-t. 30 perces keverés után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, az olajos maradékot 50 ml etil-acetátban oldjuk és 0,88 ml N,N- dimetil-etilén-diamint adunk hozzá. 15 perc múlva az oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, 1 raól/1 koncentrációjú sósav-oldattal, vízzel és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos maradékot 30 ml éterrel megszilárdítjuk, a csapadékot szűrjük, éterrel mossuk. A védett peptid súlya 2,5 g (88%); Rf2 = 0,60. 1.0 g (1,42 mmól) Így kapott Boc-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB-t 6 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldunk, majd a szabad tripeptid-hidrokloridot (Rf3 = 0,30) 1 perc múlva száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk. Azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, a pH-t 8-ra állítjuk trietil-aminnal és hozzáadunk 0,86 g Boc-Chg-OPfp-t. 30 perc múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot oldjuk 30 ml etil-acetátban és 10%-os, vizes citromsav-oldattal, vízzel, majd 5%-os nátriura-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos védett tetrapeptidet (Rí3 = 0,8) 50 ml n-hexánnal megszilárdítjuk, szűrjük és n-hexánna’ mossuk. Ezután 6 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk és 15 perc múlva a szabad tetrapeptid-hidrokloridot (Rf3 = 0,2) száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és éterrel mossuk. Azonnal oldjuk 10 ml dimetil-formamidban, a pH-t trietil-aminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0, 8 g (1,5 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OPfp-t. 30 perc múlva az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, és a bepérlási maradékot 30 ml etil-acetátban oldjuk. Hozzáadunk 0,11 ml N,N-dimetil-etilén-diamint és 15 perc múlva az elegyet 1 mól/1 koncentrációjú sósav-oldattal, vízzel és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás és bepárlás után a védett pentapeptidet (Rf1 = 0,35) 30 ml éterrel megszilárdítjuk, szűrjük és éterrel mossuk. Ezután feloldjuk 10 ml 8 mól/1 koncentrác iójú dioxános hidrogén-klorid-oldatban, 1) perc múlva a szabad pentapeptid-hidrokloridot (Rf3 = 0,35) száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük, mossuk. Azonnal feloldjuk 15 ml dimetil-formamidban, a pH-t trietil-aminral 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,75 g (2 mmól) Boc-Val-OPfp-t. 30 perces keverés után az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml kloroformban, és 10%-oa citromsav-oldattal, 1 mól/1 koncentrációjú sósav-oldattal és vízzel kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos védett hexapeptidet (Rf1 = 0,37) éterrel megszilárdítjuk, szűrjük, éterrel mossuk. Ezután 20 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldatban oldjuk és 15 perc múlva a szabad hexapeptid-hidrokloridot (Rf4 = 0,45) száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és éterrel mossuk. Azonnal oldjuk 15 ml dimetil-formamidban, a pH-t trietil-aminnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,98 g (2 mmól) Boc-Arg(NOz)-OPfp-t. 1 órai keverés után az oldatot 45 ml kloroformmal hígítjuk, 10%-os citromsav-oldattal, 1 mól/1 koncentrációjú sósav-oldattal és -űzzél kirázzuk. Szárítás és bepárlás után az olajos maradékot etanollal szilárdítjuk, szűrjük (Re2 = 0,30). A védett heptapeptidet 20 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogért-klorid-oldatban oldjuk és 20 perc múlva a szabad heptapeptid-hidrokloridot Rf3 = = f ,21) száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük, mossuk és azonnal feloldjuk 15 ml dimetil-formamidban. Az oldat pH-ját trietil-aninnal 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,59 g (1.5 mmól) Z-Sar-OPfp-t. 1 óra múlva a reakcióelegyet bepároljuk és az olajos maradékot 15 ml etanollal megszilárdítjuk, szűrjük, etanollal, majd éterrel mossuk. Termelés: 1,5 g (10% a Boc-His(Dnp)-Pro-Ala-ONB-re számolva). Op.: 194 °C (bomlik). Rf3 = 0,80. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
