191961. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,5 és 8 helyzetben szubsztituált angiotenzin-II antagonista hatású peptidek előállítására
5 191901 6 1. táb'ázat Ali analógok Aldoszteron termelés gátlása érösszehúzódás gátlása pA2-ben Sár1, Chg5, Ala®-AII 9,981 11,18 Sár1, Cpg5, Ala®-Ali 9,933 9,42 Sár1, Chg5, Lac^AII 10,390 11,29 Sár1, Cpg5, Lac®-AII 9,649 11,09 Lac1, Cpg5, Lac®-AII 8,392 8,52 HOAc1, Chg5, Ala4-Ali 8,614 9,53 Sár1, Val5, Ala8-Ali (kontrol) * 9,634 11,10 Sár1, Lac8-Ali (kontrol) ** 9,649 11,02 Sár1, Lac^AII-OEt (kontrol) ** 9,27 Sár1, HMVa-AII (kontrol) ** 10,589 OGly1, Ile4-Ali (kontrol) *** 7,94 Sár1, Ile^AII-OMe (kontrol) **** 8,98 A Chg és Cpg jelentése a fentiekben megadott. A Lac tejsavat, a ijOAc hidroxi-ecetsavat, a HMV 2-amino-2-hidroxi-3-metil-valeriánsavat, az OGly pedig «c-aminooxi-ecetsavat 25 jelent. Az -OEt és az -OMe azt jelenti, hogy a peptid etil-, illetve metilészteréről van szó. A kontrol anyagoknál a * jelentése: * : Saralasin ** : 181 008 sz. magyar szerinti anyag. szabadalmi leírás 3C *** : 177 134 sz. magyar szerinti anyag. szabadalmi leírás **** : 181 009 sz. magyar szerinti anyag. szabadalmi leírás 35 A kontrolként bemutatott Sár1, HMV8-AII bár erős aldoszteron termelést gátló hatással rendelkezik, gyógyászati felhasználását gátolja, hogy 10 Mg/kg dózisban erős, 2,6 kPa (19,6 mmHg) kezdeti vérnyomásemeló hatást 40 mutat. A táblázat adataiból látható, hogy az új analógok közül egyesek elérik, mások felülmúlják a kontrolként használt vegyületek aldoszteron termelést gátló hatását. 45 Az új vegyületek vérnyomáscsökkentő hatását in vivo éber patkányokon vizsgáltuk meg Pals módosított módszere szerint [Circ. Rés., 29, 664. (1971)]. Az eredményeket az 1. ábra szemlélteti. 50 A patkányokon először All-vel dózis-hatás görbét vettünk fel. A peptideket 1 mg/kg dózisban adtuk subcutan. A beadást követő 5 percben, majd három órán át ismételten 1,0 Mg/kg All-t adtunk i.v. A statisz- 54 tikai kiértékeléshez variancia analízist alkalmaztunk. Az ábra adataiból látható, hogy az új analógok közül a [Sár1, Chg5, Ala8]-AII valamint a [Sár1, Chg5, Lac8]-AII vérnyomás g 3 csökkentő hatása éber patkányokon szignifikánsan tartósabb mint a kontrolként használt Saralaziné. Az Ali analógok átmeneti vérnyomásemelő hatásának vizsgálata ugyancsak éber pat- 65 kányokon történt. Az Ali analógokat 20 percenként adtuk a vena jugularisba. A kiértékeléshez variancia analízist alkalmaztunk. A [Sár1, Chg5, Laca]-AII összehasonlító vizsgálatát a 2. ábra szemlélteti. Az ábra adatai szerint ezen analóg kezdeti vérnyomást emelő hatása szignifikánsan kisebb mint a kontrol Saralaziné. A találmány szerinti eljárás további részleteit az alábbi példák szemléltetik. A leírásban alkalmazott rövidítések megfelelnek a szakirodalomban általánosan elfogadott szimbólumoknak [J. Biol. Chem. 247, 977. (1972)]. Ezen túlmenően az alfa-amino-oxisavak rövidítésére a megfelelő aminosav szimbólum elé tett O-betűt használtuk (OGly = alfa-aminooxiecetsav). A vegyületek előállítása során az oldószer mentesítést Büchi-féle Rotavapor készülékben végeztük. Az olvadáspont meghatározások Dr. Tottoli-féle készülékben történtek. A vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatokhoz Merck Kieselgel 60 Fzh előkészített réteget használtunk és a kromatogrammok kifejlesztése az alábbi oldószerelegyekben történt. (Az arányok térfogatarányokat jelölnek.) 1. etilacetát: (piridin : ecetsav : víz = = 20 : 6 : 11) = 95 : 5 2. etilacetát: (piridin : ecetsav : víz = = 20 : 6 : 11) = 90 : 10 3. etilacetát: (piridin : ecetsav : víz = = 20 : 6 : 11) = 80 : 20 4. etilacetát: (piridin : ecetsav : víz = = 20 : 6 : 11) = 70 : 30 5. n-butanol : ecetsav : viz = 4:1:5 (felső fázis) 6. n-butanol : etilacetát : ecetsav : víz = = 1:1: 1 : 1 A vékonyréteg kromatogrammok előhívása ninhidrinnel, illetve klórozás után 0--tolidin + kálium-jodid-oldattal történt. Az optikai forgatás értékét Perkin-Elmer 141 polariméter segítségével határoztuk meg. A végtermék tisztítására 0,5 g szabad 4
