191961. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,5 és 8 helyzetben szubsztituált angiotenzin-II antagonista hatású peptidek előállítására
3 191961 4 A találmány tárgyát az X-Arg-Val-Tyr-Y-His-Pro-W-OH (I) (I) általános képletű új, angiotenzin-II antagonista hatású peptidek, - ahol X szarkozil-, L-laktoil- vagy hidroxi-acetil-cso portot, Y L-ciklopentil-glicil- vagy L-ciklohexil-glicil-csoportot, W pedig L-alanil- vagy L-laktoil-csoportot jelent -valamint az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítási eljárása képezi. Az angiotenzin-I-ből a konverting enzim hatására felszabaduló angiotenzin-Il (a továbbiakban Ali) vérnyomásemelő hatása a szervezetben kettős mechanizmus szerint jön létre. Egyfelől az Ali közvetlenül hat a simaizomzatra, így ennek összehúzódásával emeli a perifériás ellenállást, ami a vérnyomás emelkedéséhez vezet. Másfelől az Ali fokozza a mellékvese kéregben az aldoszteron felszabadulásét, ami a nátrium és a viz visszatartásával sziiffén vérnyomás emelkedést idéz elő. Az Ali antagonisták az Ali olyan szerkezeti analógjai, amelyek mindkét fent vázolt mechanizmusban blokkolják az Ali receptorokat és ezáltal meggátolják, hogy a hormon hatását kifejtse. Az első hatásos analógok szintézise óta (2,127,393 sz. NSZK közrebocsátási irat) számos Ali antagonistát állítottak elő. Kiderült, hogy jó antagonists hatással azok az analógok birnak, melyekben a 8-as helyzetű fenilalanin alifás oldalláncú aminosavval van helyettesítve. A hatás fokozható ha az 1-helyzetbe szarkozil-, szuççinil-, aminooxiacetilstb. csoportokat illetve a 8-helyzetbe hidroxisavakat építünk be.. (2.758.483, 2.602.803, 2.846.200 sz. NSZK-beli közrebocsátási irat, 177 133, 177 134, 181 008 sz. magyar szabadalmi leírás). Ezek a módosítások hatékony Ali antagonistákhoz vezettek, de forgalomba mindeddig csak a [Sár1, Val5, Ala8]-AII analóg (Saralasin*) került diagnosztikai célokra. Az Ali antagonisták szélesebbkörü elterjedését a gyógyászatban rövid hatástartamuk mellett elsősorban az gátolja, hogy valamennyi eddig szintetizált analógnak átmeneti agonista hatása is van [Fed. Proc., 35, 2486. (1976)]. így például az egyik hatékony antagonists, a [Sár1, Thr(OMe)8]-AII (3.976.770 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leirás) in vivo kísérletekben 1,7-2,0 kPa (13-15 mmHg) kezdeti vérnyomás emelkedést idézett elő [J. Med. Chem., 20, 1051. (1977)]. Azok az analógok viszont amelyek nem, vagy csak kis mértékű átmeneti agonista hatást mutattak, gyenge antagonistáknak bizonyultak. . Ilyen például a gyenge agonista aktivitással biró [Sar1,Thr8]-AII, mely nem rendelkezik az aldoszteron felszabadítást gátló hatással [Eur. J. Clin. Pharm., 23, 7. (1982)]. Nem sikerült tehát eddig oly hatékony antagonists hatású Ali analógot szintetizálni, mely nem, vagy csak kismértékű átmeneti agonista hatással rendelkezik. Azt találtuk, hogy amennyiben az Ali antagonisták molekulájában az 5-ös helyzetű izoleucint ciklohexil-glicinnel (a továbbiakban Chg) vagy ciklopentil-glicinnel (a továbbiakban Cpg) helyettesítjük, akkor olyan Ali inhibitorokhoz jutunk, amelyek jelentős, nyújtott vérnyomáscsökkentő hatással, az eddig ismert antagonisták közül a legerősebb aldoszteron felszabadulást gátló hatással és csak csekély átmeneti agonista aktivitással rendelkeznek. A találmány szerint úgy állítjuk elő az X-Arg-Val-Tyr-Y-His-Pro-W-OH (I) (I) általános képletű oktapeptideket, hogy aktív-észteres technikával, a C-terminális savból kiindulva lépésenkénti kondenzációval szintetizálunk egy Q-X'-ArgiAj-Val-Tyr(B)-Y-His(E)-Pro-W-OG (II) (II) általános képletű védett oktapeptidet - ahol Y és W jelentése a fenti, Q benzil-oxi-karbonil-csoportot, A nitro-csoportot, B benzil-csoportot, E dinitro-fenil-csoportot, G benzil- vagy nitro-benzil-csoportot és X1 x jelentésétől függően szarkozil-, vagy L-oc-amino-oxi-propionil- vagy amino-oxi-acetil-csoportot jelent - , majd ezt egy tiollal reagáltatjuk, végül az Így kapott Q-X^-ArgiAj-Val-Tyr(B)-Y-His-Pro-W-OG (III) (III) általános képletű védett oktapeptidet - ahol Q, X1, A, B, V, ¥ és G jelentése a fenti - katalitikusán hidrogénezzük. E művelet során amennyiben X1 jelentése valamely fentiek szerinti oc-amino-oxi-acil-osoport, az N-0 kötés hasadása folytén egy lépésben kapjuk az X helyén cc-hidroxi-savat tartalmazó (I) általános képletű oktapeptidet ('ásd a 177 133 sz. magyar szabadalmi leírást). Az (I) általános képletű oktapeptideket önmagában ismert módon, előnyösen cellulóz ioncserélő kromatográfiával tisztítjuk. Ennek során a vegyületeket többnyire liofilezett porok formájában nyerjük, melyek alkalmasak í.avaddiciós sóvá, vagy komplexszé alakításra. Az (I) általános képletű oktapeptidek aldoazt.eron termelést és érösszehúzódást gátló hatását in vitro vizsgáltuk meg. Az utóbbi módszer abban áll, hogy mérjük az AII-vel kiváltott érösszehúzódás gátlását izolált nyúl aorta érszeleten [J.Pharmacol. exp. Ther., 108, 129. (1953)]. A kapott eredményeket pA2-ben kifejezve az 1. táblázatban foglaltuk össze. Ugyancsak az 1. táblázat tartalmazza az aldoszteron termelést gátló hatást is. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
