191746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, a vér koleszterin szintjét csökkentő fehérjék és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 191.746 2 A találmány tárgya eljárás új, a vér koleszterin - -szintjét csökkentő protein (továbbiakban jelölése „CRP”) és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Ismeretes, hogy" az atherosclerosis vagy hiperlipidemia, mely a középkorúak vagy idősek betegsége, terápiás kezelésére náiány gyógyászati készítményt, mint például a klofibrátot használják. Mégis,a kívánt hatások teljes mértékben nem elégíthetők ki ezeknek az ismert készítményeknek az alkalmazásával, például a farmakológiái hatások és mellékhatások szempontjából, ezért jelentősen megnövekedett az igény hatékonyabb és biztonságosabb gyógyszerek kidolgozására. A találmány célja új, emlős állatokban a vérkoleszterin-szintjét csökkentő fehérje, a CRP kidolgozása volt, amely emlősöknek biztonságosan adagolható. A találmány további tárgya eljárás a fenti új fehérjét, a CRP-t hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány szerinti új fehérje, amely emlősállatokban a vér koleszterin-szintjét csökkenti, a következő tulajdonságokkal rendelkezik: a) Gélen való szűrés után a mólsúlya: 30.000 ± ±7.000 b) Izoelektromos pontja : 7 9 ± 0,2 c) Aminosav-összetétele (mól %): Glidn 2523 Alanin 10J98 Glutamin 10,34 Aszparagin 820 Lizin 6,39 Leudn 5,58 Valin 5,41 Izoleudn 5,18 Treonin 423 Tirozin 4,19 Szerin 3,46 Prolin 2,62 Ar ginin 2,60 Fenil alan in 2,51 Metionin 1,56 Hiszti din 120 Gsztein 0,16 d) Az elektroforézis eredménye: éles sáv az elektroforézíshez használt poliakrilamid gél anódos oldalán A találmány szerinti eljárás illusztrálására csatoljuk az 1-4. ábrát. Az 1. ábra a talámány szerinti CRP fehérje elektroforetikus profilját ábrázolja poliakrilamid gélen, a 2—4. ábra a gélszűrés eludós módszerének, melyet a későbbiek folyamán ismertetünk, be - 5 mutatására szolgál. A találmány szerint az új fehérjét úgy állítjuk elő, hogy egy Streptococcus specieszhez tartozó S. faedum, S. faecalis, S. avium, S.bovis, S.salivarius.S.durans, S. mitis, S. equinus mikroorganizmust megfelelő tápközegben tenyésztünk, majd a vér koleszterin- 10 -szintjét csökkentő aktív fehérjét a baktérium sejtek feldarabolása után kinyerjük a közegből. A találmány szerinti fehérje orálisan adagolva nem toxikus. Az eljárásban használatos mikroorganizmust, az 1(. előállítási módszert, a ftzikokémiai tulajdonságokat. ' ® és a találmány szerinti CRP fehérje farmakológiái tulajdonságait az alábbiakban részletezzük. Mikroorganizmusok on l. Fajok A találmány szerinti eljárásban használható mikroorganizmusok a Streptococcus törzsbe tartoznak: Streptococcus faedum, Streptococcus faecalis,Streptococcus bovis, Streptococcus avium, Streptococcus dur ans, Streptococcus salivarius, Streptococcus mitis, 25 Streptococcus equinus. Ezeken kívül a bélrendszerben születéstől kezdve meglévő fajok is előnyösen alkalmazhatók. Ezeknek a mikroorganizmusoknak a tipikus példányait, melyeket egészséges emberi bélsárból izoláltunk, 1982. július 15-től kezdődően helyeztük letét- 30 be a japán Fermentádós Kísérleti Intézetnél (FRI) (a „FERM—P”-vel jelzett számok a fenti intézet deponálási számai). A FRI a budapesti, Mikroorganizmusok Letétbe Helyezésére Vonatkozó Szerződés értelmében nemzetközi deponálási hatóságnak minősül. __ A letétbe helyezett mikroorganizmusok deponálási számait az 1. táblázat tartalmazza. 1.TÁBLÁZAT A törzs neve Deponálási száma Streptococcus faedum Streptococcus faecalis Streptococcus avium Streptococcus salivarius Streptococcus durans Streptococcus mitis Streptococcus equinus ADV1Q09 FERM P-6624 FERM BP-296 ADV9001 FERM P-6625 FERM BP -297 AD2003 FERM P-6626 FERM BP-298 ADV10001 FERM P-6627 FERM BP-299 ADV3001 FERM P-6628 FERM BP-300 ADV7001 FERM P-6629 FERM BP-301 ADV8001 FERM P-6630 FERM BP-302 2. A mikroorganizmusok mikrobiológiai tulajdonságai Általános mikrobiológiai tulajdonságok A találmány szerinti mikroorganizmusok mikrobiológiai tulajdonságai az azonos osztályhoz tartozó mikroorganizmusokéval megegyeznek. így az általá- 55 nos mikrobiológiai tulajdonságokat, a tenyésztési módszereket és egyéb tulajdonságaikat a következő irodalmi hivatkozások Írják le : 1) Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás, 490-509 (1974) 2) Int. J. Syst. Bact. 16,114 (1966) 3) Microbiol. Immunol. 25 (3), 257-269 (1981) 4) J. Gin.Pathol. 33,53-57 (1980) 5) J. General Microbiol. 128,713-720 (1982) 6) Applied Microbiol. 23, (6), 1131-1139 (1972). A fentiekben példaként felhozott törzsek tipikus mikrobiológiai tulajdonságait a következőkben lehet összefoglalni: 2
