191743. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin szerkezeti típusú antibiotikumok előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás dannomicin /(8s-cisz)-8-acetil-10-[/3-amino-2,3,6-tridezoxi-a-L-lixohexopiranozil/-oxi ]-1 -metoxi-6,8,11 -trihidroxi-7,8,9,1O-tetrahidro-5,12-naftacéndion/ és sói, valamint daunorubicinil /8-/l-hidroxi-etil/-10-[/3-amino-2,3,6-tridezoxi-a-L-lixohexopiranozil/-oxi]-l -metoxi-6,8,11-trihidroxi-7,8,9,10-tetrahidro-5,12-naftacéndion/, 8-acetil-l - -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,ll-trihidroxi-5,12- -naftacén dión, 8-acetil-l -metoxi-7,8,9,10-te trahidro-6,8,10,1 l-tetrahidroxi-5,12-naftacéndion, és 8-/1 -hidroxietil/-!-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi-5,12-naftacéndion előállítására fermentációs úton. Ismeretes, hogy a daunomicin jelentős rákellenes hatással rendelkező antraciklin-típusu antibiotikum, melyet a Streptomyces peuceuticus FI 1762 jelű sugárgomba törzs tenyésztéből izoláltak (12 15 864 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli közrebocsátási irat, 1963). Később, különböző neveken leírtak néhány antracíklin-típusú rákellenes antibiotikumot, amelyekről kiderült, hogy azonosak a daunomicinnel. Ezek a következők: rubomicin, melyet a Streptomyces coeruleorubidus bioszintetizál (Antibiotiki 11, 867, 1966), daunorubicin (illetve rubidomicin), melyet a Streptomyces griseus var. rubidofaciens D. S. 32041 jelű törzs (198 09 187. sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli közrebocsátási irat) és a Streptomyces bifurcus D. S. 23219 jelű törzs (741 814. sz. belga szabadalmi leírás) termel, a mitochromin D, amelyet a Streptomyces viridochromogenes B 32251 jelű törzs (ATCC 21343) és a Streptomyces griseo-laquueus B 105 261 jelű törzs (ATCC 21344) (19 54 047 számú Német Szövetségi Köztársaságbeli közrebocsátási irat) állít elő, a leukaemomycin C, amelyet a Streptomyces griseus termel (100 943 sz. Német Demokratikus Köztársaság-beli szabadalmi leírás). A daunorubicinol ugyancsak tumorgátló hatású antibiotikum, melyet a Streptomyces coeruleorubidus bioszintetizál (19 11 240 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi közrebocsátási irat), de előállítható daunomicinből is. kémiai vagy enzimatíkus redukcióval (24 56 139 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi közrebocsátási irat). A 8-acetil-1 -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,10,11- -tetrahidroxi-5,12-naftacéndiont, a daunomicin aglukonját kiindulási anyagként használják olyan antraciklinvázas, rákellenes antibiotikum származékok előállítására, melyek a daunomicinben előforduló daunozamin helyett más, gyógyászati szempontból előnyösebb cukorkomponenst tartalmaznak [á. Med. Chem. 18, 703 (1975), J. Med. Chem. 22, 121 (1979)]. A 8-acetil-l -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11 -trihidroxi-5,12-naftacéndion, és 8-/l-hidroxietil/-l-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,l l-trihidroxi-5,12-naftacéndion ugyancsak kedvező kiindulási anyagok antraciklinvázas antibiotikumok és a vázban, az oldalláncban vagy a cukorrészben módosított szerkezetű származékaik kémiai szintézisében [J. Am. Chem. Soc. 98, 1967(1976)]. ökológiai vizsgálataink során magyarországi talajmintából egy olyan Streptomyces törzset izoláltunk, mely alkalmas a daunomicin ipari előállítására, ugyanakkor minden eddig ismert, daunomicint termelő Streptomyces fajtától rendszertanilag eltérő. A törzs értékes tulajdonsága, hogy a daunorubicinol antibiotikum, valamint rákellenes antibiotikum-származékok kiindulási anyagául hasznosítható antraciklin-vázas intermedierek [8-acetil-1 -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,1 l-trihidroxi-5,12-naftacéndíon, 8-acetil-1-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,10,1 1 -tetrahidroxi-5,12- -naftacéndion és 8-/l-hidroxietil/-l-metoxi-7,8,9,10- -tetrahidro-6,8,1 l-trihidroxi-5,12-naftacéndion ]bioszintézisére is képes. Az általunk izolált törzset 1980 november 11-én MNG 00200 szám alatt, N424 jelzéssel az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében letétbe helyeztük. E törzset az 1SP (International Streptomyces Project) által javasolt morfológiai sajátságok és diagnosztikai bélyegek alapján (B. E. Schierling és D. Gottlieb: Methods Manual International Cooperative Project for Description and Deposition of Type Cultures of Streptomycetes, Delaware, Ohio, 1964) az alábbiakban írjuk le: Légmicélium szln-szeriesz: kék. Szubsztrátmicélium szin-szeriesz: sárgabarna * vörös. Spóratartók típusa: spirál. Spórafelület (elektron optika), tüskés. A légmicélium és spóraképzés intenzitása táptalajonként változik. Melanoid pigment termelés pepton-vas agaron: pozitív, tirozin agaron: negatív. Oldódó pigment (indikátor jellegű), vörös. A törzs cukorbontó képességét Pridham és Gottlieb módszere szerint (J. Bact. 56, 107, 1948) határoztuk meg. és az alábbi eredményeket kaptuk: D-glükóz, L-arabinóz, D-xilóz, inozit, D-mannit, D-fruktóz, szacharóz, ramnóz és raffinóz jó növekedést biztosítanak. A cukorbontásokat 28 C-on végeztük. A törzs 24 és 35°C között jól növekszik. A Streptomyces sp. N-424 jelű törzs fenti morfo lógiai és biokémiai-fiziológiai tulajdonságait összevetve a daunomicint termelő ismert Streptomyces fajok ezen tulajdonságaival kitűnik, hogy a Streptomyces sp. N-424 jelű törzs lényegesen eltér a Streptomyces peuceuticus fajtól. Az utóbbi ugyanis ornamentálatlan spórákat termel, légmicéliuma színe alapján a vörös-szerieszbe tartozik, nem kromogén és eltérő a szénforrás értékesítési spektruma. A Streptomyces sp. N424 jelű törzs nem tartozik a Streptomyces coeruleorubidus fajhoz sem. A Streptomyces coeruleorubidus szubsztrát micéliumában disztink zöld, illetve nem színváltó vörös endopígment mutatható ki. A Streptomyces sp. N-424 jelű törzs szubsztrát micéliuma vörösesbarna és pH indikátor karakterű: vörösről bíborszínűre változik. Ezen kívül a Streptomyces coeruleorubidus a melanoid-pigment termelés vonatkozásában mind vas-pepton agaron, mind tirozin agaron pozitív. Ezzel szemben a Streptomyces sp. N-424 jelű törzs tirozin agaron melanoid-pigmentet nem termel. A Streptomyces sp. N-424 jelű törzs számos tulajdonságában alapvetően eltér a Streptomyces griseus fajtól is, mivel az utóbbi spóratartója nem spirális, melanoid-pigmentet egyáltalán nem termel, és más a szénforrás értékesítésének spektruma is. A Streptomyces sp. N-424 jelű törzs eltérése a Streptomyces bifurcustól szintén számottevő, ugyanis az utóbbi sem termel 191 743 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
