191740. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új spiro-pirrolidin-2,5-dionok-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 2 191 740 tegeknek különböző módon, például orális avagy parenterális készítmények formájában adhatók. 1. kísérlet Az aldóz-reduktáz enzim hatásának in vitro meggátlása A vegyületek aldóz-reduktáz enzim hatásának meggátlására való aktivitását Hayman és tsai. [J. Bioi. Chem., 240, 877, 65] módszere szerint vizsgáltuk. Az ebben a vizsgálatban használt aldóz-reduktáz készítmény patkány szemlencséből származó, részletesen tisztított enzim volt. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. Az IC50-értékek azok a moláris koncentrációk, amelyek az aldóz-reduktáz enzim hatását 50%-ban meggátolják. 1. táblázat Vegyület ICso 1. példa szerinti 6 x 10"® 2. példa szerinti 4 x 10'7 3. példa szerinti 9 x 10~* 4. példa szerinti 3,5 x 10‘7 5. példa szerinti 5 x lO-4 6. példa szerinti 3,5 x 10'7 7. példa szerinti 2 x 10'* 8. példa szerinti 6 x 10'7 10. példa szerinti 2 x 10'* 11. példa szerinti 1,5 x 10 * 12. példa szerinti 2 x 10'7 13. példa szerinti 7 x 10'7 14. példa szerinti 7 x 10"7 15. példa szerinti 2,5 x 10'* 16. példa szerinti' 3,5 x 10'* standard hatóanyag* 5 x 10'7 "Szorbinil )[(4S)-2,3-dihidrç-6^fluoro-spiro[4H-l -benzopirán-4,4 -imidazolidin]-2 ,5 idion] Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerint előállított vegyületek képesek meggátolni az aldóz-reduktáz enzim hatását in vitro. 2. kísérlet Az aldóz-reduktáz enzim hatásának in vivo meggátlása Azért, hogy felbecsüljük, hogy a találmány szerint előállított vegyületek képesek-e az enzim hatásának in vivo meggátlására, a következő előzetes vizsgálatot végeztük el. A találmány szerint előállított vegyületeket orálisan adagoltuk patkányoknak 25 mg/kg dózisban. Két és öt órával később vérmintákat vettünk a patkányokból. A vegyület helyett 0,5 ml szérumot adtunk a vizsgálati rendszerhez, melyet az 1. példában írtunk le. Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 2. táblázat Vegyület Az aldóz reduktáz enzim hatásának meggátlása (in vivo) a kezelés után eltelt idő 2 óra 5 óra 1. példa szerinti 61,2 49,8 2. példa szerinti 71,7 68,5 3. példa szerinti 53,3 42,6 4. példa szerinti 71,5 70,2 5. példa szerinti 52,3 47,6 6. példa szerinti 11,8 13,4 7. példa szerinti 48,4 33,8 8. példa szerinti 62,5 61,4 10. példa szerinti 72,3 73,9 H. példa szerinti 72,3 81,2 12 példa szerinti 78,2 81,2 13 példa szerinti 75,1 75,8 14 példa szerinti 74,9 75,2 sta ndard hatóany ag* 79,8 79,5 “Szorbinil ■j 5 A találmány szerint előállított vegyületek jelentőser meggátolják az aldóz-reduktáz enzim hatását in vivo és alkalmasak a diabetes mellitus-hoz kapcsolódó komplikációk kezelésére. 3. kísérlet 20 Ani-konvulzív vizsgálat A találmány szerint előállított vegyületek az anti-konvulzív aktivitás hiányával is jellemezhetők. A 2. példa szerint előállított vegyülettel egereket (ICR törzs) kezeltünk orálisan 50, 200, 500 és 800 mg/kg dózisban, és fenilén-tetrazolt adtunk ne- 25 kik 100 mg/kg dózisban intraperitoneálisan 2 órával később. ,A 2. példa szerint előállított vegyület nem szorította vissza a pentilén-tetrazol konvulzív hatását, de a szorbinil és egy másik antikonvulzív szer, a feni«« tóin dózisfüggő védelmet biztosított a krónikus ou kcnvulzió ellen. 4. kísérlet Akut toxicitás egereken Az akut toxicitást úgy vizsgáltuk, hogy a talál- 35 niány szerint előállított vegyületekkel orálisan kezeltünk éheztetett egereket (ICR törzs). A LDS0 értékeket a 3. táblázat mutatja. 40 45 Vogyület 6. példa szerinti 8. példa szerinti 11. példa szerinti 12. példa szerinti 13. példa szerinti 15. példa szerinti 3. táblázat LD50 > 2 g/kg > 2 g/kg > 2 g/kg > 2 g/kg > 1 g/kg >2 g/kg A találmány szerint előállított vegyületek alacsony toxicitását a 3. táblázat eredményei bizonyít-50 Ezen adatok szerint a találmány szerint előállított vegyületek biztonságosak és alkalmasak arra, hogy olyan betegeket kezeljünk, amelyek a krónikus diabétesszel járó komplikációkban szenvednek akár hosszú időn keresztül is mindenféle nemkívánatos 55 mellékhatás nélkül. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük anélkül, hogy a találmányt a példákra korlátoznánk. A találmány szerinti vegyületek előállításához kiindulási anyagként használt (Vili) általános képle- 60 tű vegyületeket a következő módon állítottuk elő. 4
