191737. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új immunmodulátor hatású hisztidin-peptidek előállítására
1 191.737 2 /. példa 1. lépés Boc-D-Met-His-Phe-OMe 4,13 g (9,6 mmól) Boc-D-Met-Oh. DCHA-t szuszpendálunk 40 cmt3 éterben, a szuszpenziót kétszer extraháljuk 26 cm3 5%-os káliumbidrogénszulfát oldattal, és a vizes fázist kétszer kirázzuk éterrel. Az egyesített éteres fázisokat kétszer mossuk vízzel, majd vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot 70 cm3 kloroformban oldjuk, és az oldathoz 3,98 g (8,0 mmól) H His-Phe-OMe. 2HBr.H20 100 cm3 kloroformmal készített oldatát adjuk. A reakcióelegyet — 10°C-ra lehűtjük, és 1,65 g (8,0 mmól) dicíklohexil-karbodiimidet, valamint 2,23 cm3 (16 mmól) trietilamint adunk hozzá. 48 óra elteltével a kivált diciklohexil-kaibamídot kiszűrjük, a szűtletet telített bórsavoldattal háromszor és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A terméket acetonitril, éter és n-hexán elegyéböl kristályosítjuk. 2,16 g (49%) cím szerinti terméket kapunk, Op.: 135—137 °C. A terméket metanol, éter és n-hexán elegyéböl átkristályosítjuk. Termelés: 1,54 g (28%) vékonyrétegkromatográfiai lag homogén Op.: 141,5-143,5 °C RfA:0,72 Rfß:0,11 {o.]2q: —12,8° (c=0,5 metanolban) Elemanalizis a C26H?7N506S összegképlet alapján (M=547,67) számított, %: C 57,02 H 6,81, N 12,79, S5,85 talált, %: C 57,45 H 6,95 N 13,27 S5,99 IR: 3300 (NH-, amid), 1750 (C=0, észter), 1680 és 1650 (OO, amid), 700 és 740 (aromás, monoszub.) crrf1 2. lépés H- D-Me t-His-Phe- OMe. 2HCI 1,75 g (3,2 mmól) Boc-D-Met-His-Phe-OMe 30 cm3 4n sósavas tetrahidrofuránnal készített oldatát szobahőmérsékleten egy órán át keverjük, majd betöményítjük és tetrahidrofuránnal újból hígítjuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük, végül a betöményített oldatból a kivált csapadékot kiszűrjük, A termék levegőn állva elfoiyósodik, ezért vákuumexszikkátorban szárítjuk szilárd kálium-hidroxid felett. 1,59 g (95%) nyers terméket kapunk, amelyet metanol és éter elegyéböl átkristályosítunk. Termelés: 1,33 g (80%), higroszkópos. RtA: 0,45 C2 )H2olM504S.2HCI Ms: 520,49 IR: 1740 (C=0, észter), 1670 (C=0, amid) cm'1 3. lépés For D Met His-Phe-OMe 133 g (2,5 mmól) H-D-Met His-Phe OMe 2HCI 7 40 cm3 vízmentes dimetil-formamiddal készített oldatát 0 °C ra hűtjük majd 0 71 cm3 (5,1 mmól) trietil amint és 0,73 g (3,3 mmól) hangyasav triklór-fenilésztert adunk hozzá Az oldatot szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük majd vákuumban bepároljuk és a maradékot kloroformban oldjuk Az oldatot háromszor telített nátrium-klorid oldattal extraháljuk a kivált anyagot szűrjük és a szurletet magnézium szulfáttal szárítjuk A terméket éterrel kicsapjuk, majd metanol és éter elegyéböl átkristályosítjuk. 0,28 g (24%) cím szerinti terméket kapunk amely 135-138 C-on olvad és vékonyrétegkromatográfiailag homogén RfA 0,65 Rfc 0,53-19,6° (c 0 5 MeOH) Analitikai vizsgálathoz az anyagot 4 órán át szárítjuk vákuumpisztolyban 60 °C-on P2Os felett. Elemanalizis a C22H29NsO,S összegképlet alapján (M = 475,575) számított % C 55 56 H 6,15 N 14 73 S 6 74 talált, %: C 58,10 H 7 56 N 14,71 S 6 57 A vizsgálat klórt nem mutatott ki. IR 3280 (NH , amid), 1740 (C=0, észter) 1640 (OO amid, összeolvadt), 700 és 740 (aromás mono szub.) cm-1 UV az imidazol gyűrű nitrogénatomján nem mutatott ki formilcsoportot 2. példa F< r-Met-His Phe OMe 6 20 g (12,5 mmól) H His-Phe OMe 2HBr.H20 145 cm3 koroformmal készített oldatához 2 65 g (15 mmól) For-Met-OH-t adunk Az oldatot ~10°C- ra hűtjük, majd 2,58 g (12,5 mmól) diciklohexil karbodiimídet és 3,5 cm3 (25 mmól) trietil amint adunk hozzá. Az elegyet hűtőszekrényben két napig állni hagyjuk majd a kivált capadékot (nagyrészt diciklohexil karbamid) kiszűrjük és kloroformmal mossuk. A mosófolyadékkal egyesített szurletet telített bórsav oldattal, majd telített nártium-hidrogén karbonáttal extraháljuk, vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk A maradékot kloroform és éter elegyéböl, utána acetonitril és éter elegyéböl acetonitrittel még egyszer kimossuk, és a mosófolyadékból a terméket éterrel kicsapjuk. 0,77 g (12%) vékonykromatoqráfiailag egységes terméket nyerünk. Op 142—144 U RfA 0,58 Rfc 0,44 [a]2|3 16 4° (c 0,5 dimetil-formamidban) Analitikai vizsgálathoz az anyagct 4 órán át szárítjuk 80°Con vákuum-pisztolyban P205 felett. Elemanalízis a C22H29N5OsS 2H20 összegképlet alapján (M = 511 608) számított, % C 51,65 H 6 11 N 13 69 S 6 27 talált, % C 51,42 H 6 08 N 13,62 S 6 27 IR megegyezik a D-Met-származékkal. 3. példa 1. lépés Boc-His Pbe-OBzt 6,83 g (25 mmól) Boc His-N2Hj 20 cm3 vízmentes dimetil-formamiddal készített oldatát 15°C-ra hűtjük utána 34 cm3 2n sósavas tetrahidrofuránt, majd 3 42 cm3 (26 mmól) izopentil-nitritet, és 10 perc elteltével 10,8 cm3 (25 mmól) trietil amin tetrahidrofurán és dimetil-formamid 1.1 arányú elegyének 46 cn3 -ével készített oldatát és végül 7,42 g (25 mmól) H-Phe-OBzI.HCI és 3 4 cm3 trietil amin 80 cm3 dimetil-formamiddal készített, -10°Cra hűtött oldatát adjuk a reakciólegyhez. A reakcióelegyet 30 percen át keverjük utána a kivált aminsót kiszűrjük, a szurletet vákuumban bepároljuk és a maradékot etilacetátban oldjuk Az oldatot telített bórsav-oldattal hatszor 5%-os nátrium hidrogén-karbonát-oldattal háromszor extraháljuk, a szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A mara5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
