191737. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új immunmodulátor hatású hisztidin-peptidek előállítására
1 191.737 2 dékot etil acetát és n hexán elegyéből átkristályo sítjuk. 6,45 g (52%) nyers terméket kapunk, amely 178 180°C-on olvad. Újabb átkristályosltás után a hozam 6 27 g (51%) 180 -182 °C on olvadó, vé konykromatográfiailag egységes termék. [cr]:$ 0 20 RfA 0,70 Analízishez az anyagot 4 órán át szárítjuk 80 °C- on vákuumpisztolyban P2Os felett. Elemanalízis a C2-7H32N4C)5 összegképlet alapján (M = 492 583) számított % C 65,84 H 6,55 N 11,38 talált, % C 66,43 H 7,04 N 10 89 IR 3415 és 3300 (NH-, amid), 1730 (OO, észter), 1720 (C=0, Boc), 1650 (C=0, amid) cm'1 2. lépés H-His-Phe OBzl.2HCI 1,58 g (3,2 mmól) Boc His-Phe OBzI 10 cm3 4,5n sósavas etil acetáttal készített oldatát szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük utána vákuumban betöményítjük majd etil acetáttal újból hígítjuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük Utána az elegyet szárazra pároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Szűrés és éteres mosás után az anyagot vákuumexszikkátorban szárítjuk szilárd káliurn-hidroxid felett. RfA 0,40 C22H24N.,03 Ms 465 385 IR: 1740 (OO, észter) 1680 (OO, amid) cm-1 3. lépés Boc-Met-His-Phe OBzI 6,06 g (14 mmól) Boc Met OH.DCHA 60 cm3 éterrel készített szuszpenzióját 38 cm3 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal kétszer extraháljuk, a vizes fázist kétszer mossuk éterrel, utána az egyesített éteres fázisokat kétszer mossuk vízzel, A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, vákuumban bepároljuk és a maradékot 75 cm3 kloroformban oldjuk, Az oldathoz 6,55 g (14 mmól) H His-Phe OBzI.2HCI 125 cm3 kloroformmal készített oldatát adjuk és a reakcióelegyet -10°C ra hűtjük. Ezen a hőfokon 2,89 g (14 mmól) diciklohexil-karbodiimidet, 3,90 cm3 (28 mmól) trietilamint és 1,89 g (14 mmól) hidroxi benztriazolt adunk az elegyhez Az elegyet szobahőmérsékleten 3 napig keverjük, a főleg diciklohexil karbamidból álló csapadékot kiszűrjük a szűrletet 100 cm3 kloroformmal hígítjuk és telített bórsav oldattal hatszor, 5% os nátrium-hidrogén karbonát-oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot kloroform, éter és n hexán elegyéből átkristályosítjuk. Termelés 6,22 g (71%). Analitikai vizsgálathoz kis mennyiségű anyagot átkristályosítunk éter és n-hexán elegyéből. Az anyagnak nincs éles olvadáspontja mert higroszkópos, levegőn lassan elfolyósodik. A termék vékonyrétegkromatográfiailag egységes tal lÍ "26 4° (c 0,5, metanolban) Rfß 0,19 RfA 0,70 Elemanalízis a C32H4106N5S összegképlet alapján (M = 623 786) számított, %: C 61 62 H 6 63 N11,23 talált, %: C 61,51 H 7 09 N 11 80 IR 3300 (NH-, amid) 1740 (OO észter), a OO, Boc- és amid sáv összeolvadt 740 és 690 (aromás mcnoszub ) cm'1 4. lépés Boc-Met His Phe OH 0 91 g (14 mmól) Boc Met His-Phe OEzl-t feloldunk dimetil formamid víz és diizopropil etil-amin 10 11 arányú elegyében. 0 10 g 10% os palládiumcsontszén katalizátort szuszpendálunk metanol és víz 1 L arányú elegyének 20 cm3 ében A katalizátort előhidrogénezzük, majd hozzáadjuk a peptid oldatát 4s még 2 cm3 diizopropil amint. A számított mennyiségű hidrogéngáz felvételéhez mintegy 12—15 óra szükséges Amikor a rendszer már nem vesz fel több hidrogént, a katalizátort kiszűrjük, a szürletet vákuumban elpároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A terméket etanol és éter elegyéből kristályosítjuk- 0,36 g (48%) vékonyrétegkromatográfiailag egységes terméket nyerünk op 154 156 °C RfA 0,66 RfB 0 10 ;a]2[^ -25,0° (c = 0 5 metanolban) Elén-analízis a C25H3506N5S összegképlet alapján 'M = 533 661) számított %: C 56 27, H 6 61 N 13 12 S 6,01 "alált, %: C 56 22 H 7 39 N 13 19 S 6 45. R 3300 (NH , amid), 1750 (C=0, karbonsav), 1670 (C=0, Boc) 1650 (C=0 amid) cm-1 4. példa 1. lépés Z-Nle-His /V2 H3 1.54 g (3,0 mmól) Z-NleOPcp 20 cm3 diklór-metánnal készített oldatához 0,87 g (3 6 mmól) H-His OMe.2HCI ot, majd 134 cm3 trietil-amint adunk és az elegyet két napig állni hagyjuk, majd ''ákuumban bepároljuk. A maradékot kloroformban feloldjuk, és az oldatot háromszor 5%-os nátriumhidrogén karbonát-oldattal háromszor vízzel majd háromszor telített bórsav-oldattal, majd újból háromszor vízzel kirázzuk A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk A maradékot kevés etanolban oldjuk, és az oldathoz 0,29 cm3 (6 mmól) hidrazin hidrátot adunk. A kivált anyagot két nap múlva kiszűrjük, etanollal mossuk és etanolból átkristályosítjuk, ^ermelés 0,47 g (38%) Op 193-195°C Elemanalízis a C20H28N604 összegképlet alapján (M = 415,484) számított, %: C 57,82 H 6 55 N 20 23 talált, % C 57 86 H 7 13 N 20,21. IR 3500 3100 (NH hidrazid), 3305 (NH-, amid), 3030 (CH-, aromás), 1705 (C=0 észter), 1660 (C=0 Z-), 1640 (C=0 amid), 690 és 750 (aromás monoszub ) cm"1 2 lépés Z Nle-His Phe-OBzI 0,43 g (1 0 mmól) Z Nie His N2 H3 4,6 cm3 dimetil formamiddal készített oldatához -15°C on 2 5 cm3 után 30 °C-on 0,25 cm3 izoamil-nitritet adunk és az elegyet 20 °C on 30 percen át keverjük. Egyidejűleg 0,33 g (1,16 mmól) H-Phe OBzI.HCI 10,7 cm3 dimetil-formamiddal készített oldatához 0 72 cm3 (5,13 mmól) trietil-amint csepegtetünk. Az oldatot —20 °C ra lehűtjük, és a fenti peptidazid oldatot hozzácsepegtetjük Az elegyet -20 °C-on 30 percen át keverjük, utána éjszakára hűtőszekrénybe tesszük. Az oldatot vákuumban bepároljuk Az olajos maradékot kloroformban oldjuk és az oldatot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
